摘要
附子为毛茛科植物乌头的根，具有回阳救逆，补火助阳，逐风寒湿邪的功效，但毒性较强，因而需要与其它药物合用达到减毒的目的。人参为五加科多年生草本植物的根，是中国传统中医临床应用的一种补气中药。甘草为豆科植物的根，是中国常用的大宗中药材，常为佐使药在中药方剂中使用。 在动物实验中，首先通过小鼠LD50，大鼠血液生化学检测和组织病理学检测，考察人参、炙甘草对附子的减毒作用。其次，利用实时荧光定量PCR和Western blot的实验方法，测定人参和炙甘草是否能通过调控CYP450酶的表达减轻附子毒性。在细胞实验中，首先利用MTS法和LDH法测定HepG2和H9c2细胞的活性以及毒性，确定最适给药浓度和时间。其次，利用实时荧光定量PCR和Western blot的实验方法，测定人参皂苷和炙甘草单体成分是否能通过调控CYP450酶的表达减轻乌头碱毒性。 1、附子单用LD50为22.862g.kg-1.d-1，人参与附子合用LD50为31.346g.kg-1.d-1，炙甘草与附子合用LD50为29.804g.kg-1.d-1，人参、炙甘草与附子合用LD50为29.962g.kg-1.d-1。 2、实时荧光定量PCR和Western blot结果显示，附子下调大鼠肝脏和心脏CYP1A2、CYP2C11、CYP3A1、CYP2J3mRNA和蛋白质的表达，上调大鼠心脏CYP4A3、CYP4F11mRNA和蛋白质的表达。人参、炙甘草与附子合用后上调大鼠肝脏和心脏CYP1A2、CYP2C11、CYP3A1、CYP2J3mRNA和蛋白质的表达，下调大鼠心脏CYP4A3、CYP4F11mRNA和蛋白质的表达。 3、HepG2肝癌细胞中乌头碱下调CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4mRNA和蛋白质的表达，人参皂苷Rb1、甘草苷与乌头碱合用后上调CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4mRNA和蛋白质的表达。 4、H9c2心肌细胞中乌头碱下调CYP2J3，上调CYP4A3、CYP4F11mRNA和蛋白质的表达，人参皂苷Re、异甘草苷与乌头碱合用后上调CYP2J3，下调CYP4A3、CYP4F11mRNA和蛋白质的表达。 人参和炙甘草主要通过调控CYP3A1和CYP2J3的表达减轻附子对大鼠的肝毒性和心毒性；HepG2细胞中，人参皂苷Rb1和甘草苷主要通过调控CYP3A4的表达减轻乌头碱对HepG2细胞的毒性；H9c2细胞中，人参皂苷Re和异甘草苷主要通过调控CYP2J3的表达减轻乌头碱对H9c2细胞的损伤；研究结果为复方中调节附子毒性的药物合用提供理论依据。
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