摘要
赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）是一种由霉菌产生的有毒次生代谢产物。其分布广、毒性强，对动物和人类健康构成重大威胁。由于OTA可对多种食品及食品原材料造成危害，因此迫切需要采取有效的手段来预防和控制OTA的污染。将霉菌毒素与载体蛋白偶联制备人工抗原用于免疫动物，可达到抵御霉菌毒素侵害的目的。但人工抗原对生物体具有潜在的毒性，且霉菌毒素的标准品价格昂贵。相比较而言，利用噬菌体展示技术筛选模拟表位制备针对霉菌毒素的表位疫苗在预防和控制动物和人体霉菌毒素中毒方面具有很大的潜力和研究价值。 本文研究的主要内容包括： 1.利用噬菌体随机七肽库生物淘选OTA模拟表位 以抗OTA的单克隆抗体为配基，对噬菌体随机七肽库进行生物淘选。经过四轮淘选，随机挑选了30个蓝色噬菌斑。经Phage-ELISA和间接竞争ELISA鉴定，在这30个噬菌体克隆中，有27个克隆可以与抗OTA单克隆抗体结合，并且这27个阳性噬菌体克隆均能被OTA标准品有效地抑制。将这27个阳性噬菌体克隆进行DNA测序。通过它们的核苷酸序列推导出氨基酸序列。最终鉴定出27个噬菌体克隆为6种不同的OTA模拟表位。对筛选过程中出现频率最高的三个模拟表位P1、P4和P12，绘制了它们的竞争性抑制曲线。结果表明这三种噬菌体均对OTA标准品具有很好的敏感性。其中，P4对OTA标准品的敏感性最好，IC50为0.142ng/mL，其次是P1，IC50是0.347ng/mL，最后是P12，IC50是3.437ng/mL。 2.研究模拟表位与人工抗原的免疫原性 分别用1012pfu/只的特异性噬菌体P1、P4、P12和50μg/只的OTA与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）的偶联物（OTA-BSA）免疫昆明鼠。第三次免疫后7天收集小鼠血清样本，研究它们的免疫原性。在噬菌体免疫组中，包被原分别是噬菌体P1、P4和P12。在OTA-BSA免疫组中，用OTA与鸡卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）的偶联物（OTA-OVA）包被检测小鼠免疫血清的效价。间接竞争ELISA结果显示OTA-BSA免疫血清可诱导小鼠产生针对OTA的抗体。特异性噬菌体免疫血清也能够诱导抗体的产生，产生了针对该噬菌体的抗体，但未检测到针对OTA的抗体。 在这项研究中，通过生物淘选并鉴定，成功获取了6种OTA模拟表位。选择模拟表位P1、P4和P12和人工OTA-BSA分别用于免疫小鼠，结果表明OTA-BSA具有免疫原性。而用模拟表位噬菌体免疫的小鼠血清没有产生针对OTA的抗体。OTA的模拟表位是否可以用作候选疫苗还需要更深入和全面的研究。
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