摘要
目的： 建立星形胶质细胞慢性缺氧模型，观察星形胶质细胞在缺氧状态下水通道蛋白4(aquaporin4, AQP4 )、水通道蛋白9(Aquaporin-9, AQP9)、单羧酸转运体(monocarboxlate transporter, MCT)的表达变化，探讨其在慢性缺氧性脑损伤中的可能作用，以及AQP9和MCTs在慢性缺氧后乳酸转运中的作用及p38-MAPK对星形胶质细胞缺氧后AQP9的表达调控。 方法： 将原代Sprague-Dawley(SD)大鼠星形胶质细胞，随机分为对照组和缺氧损伤模型组，其中缺氧损伤模型组分别缺氧12h、24h、48h、72h，共计4个时间点。采用乳酸(lactic acid, LD)和乳酸脱氢酶活性(lactate dehydrogenase, LDH )试剂盒分别测定培养液中LD含量及LDH活性；通过免疫荧光法及免疫印迹法测定各组HIF-1α、AQP4、AQP9、MCTs、p38-MAPK的相对表达量。根据实验结果，加入p38的抑制剂，观察其对慢性缺氧后AQP9的作用。 结果： (1)缺氧损伤模型的检测：与对照组相比，缺氧损伤模型组细胞培养液中LDH活性均增高，且随缺氧时间的延长而逐渐上升，于72h达高峰(P<0.05)；免疫印迹结果显示，HIF-1α表达水平较对照组增高，24-48h达到峰值(P<0.05)； (2)乳酸检测：与对照组相比，缺氧损伤模型组细胞培养液中LD含量增高，且随缺氧时间的延长而逐渐上升，于72h达高峰(P<0.05)； (3)免疫荧光结果显示：对照组中，AQP4、AQP9在细胞胞膜和胞浆的表达呈弱阳性，而在缺氧组中，随着缺氧时间的延长，AQP4、AQP9的表达逐渐增强； (4)免疫印迹结果显示：与对照组相比，AQP4、AQP9和p-p38/p38表达逐渐増加(P<0.05)，而MCT1和MCT4的表达却下调(P<0.05)；给予p38抑制剂(SB203580)可以下调AQP9的表达。 结论： (1)星形胶质细胞慢性缺氧后，细胞胞外的乳酸脱氢酶浓度增高，AQP4和HIF-1α的表达上调，上调的AQP4，可能参与了低氧后星形胶质细胞水肿的形成； (2)星形胶质细胞慢性缺氧后，细胞胞外的乳酸浓度增加，AQP9的表达上调，而MCTs的表达下调，提示AQP9可能是慢性脑缺氧后乳酸转运的重要通路之一； (3)p38-MAPK信号通路参与调控慢性缺氧后AQP9的表达。
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