摘要
目的：观察香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的影响，并以细胞焦亡为切入点探讨香砂六君子汤改善脾虚高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的分子机制。 材料与方法：75只SD级大鼠，随机分为正常对照组、高脂组、脾虚高脂组、香砂六君子汤高剂量治疗组、香砂六君子汤中剂量治疗组，每组15只大鼠。脾虚高脂组、香砂六君子正常剂量组和香砂六君子高剂量组采用饮食不节加力竭游泳的复合方法造脾虚模型15天，高脂组、脾虚高脂组、香砂六君子汤高、中剂量组均用高脂饲料喂养14周，正常组大鼠正常饮食，第10周，香砂六君子汤中剂量组和高剂量组开始中药灌胃，香砂六君子汤中剂量治疗组按照5.67g/(Kg?d)的量灌胃，香砂六君子汤高剂量治疗组按照11.34/(Kg?d)的量灌胃。正常组、高脂组、脾虚高脂组用相应体积的生理盐水灌胃，连续给药4周。给药4周后取材，使用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，并检测各组大鼠尿液中的D-木糖排泄率;用HE染色方法和油红O染色方法观察各组大鼠的肝脏的病理形态学改变和脂质沉积的情况;用RealtimeRT-PCR法检测各组大鼠肝脏IL-1￡、IL-18、GSDMD，NLRP3，Caspase-1的mRNA的变化情况;用Elisa法检测大鼠血清及肝脏中IL-1￡和IL-18的含量;用WesternBlot法检测各组大鼠肝脏GSDMD，NLRP3，Caspase-1蛋白变化情况。 结果： 1、香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠血脂水平的影响。 与正常对照组相比，高脂组大鼠和脾虚高脂组大鼠的血清中的TC、TG、LDL-C显著增高，HDL-C显著降低(P＜0.01)，与脾虚高脂组大鼠相比，香砂六君子汤高剂量治疗组和香砂六君子汤中剂量治疗组的大鼠血清中的TC、TG、LDL-C显著降低(P＜0.05或P＜0.01)，HDL-C明显增高(P＜0.01)。 2、香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠的肝脏的病理形态学改变和脂质沉积的影响。 HE染色结果显示：与正常对照组大鼠肝脏细胞比较，高脂组和脾虚高脂组大鼠的肝细胞排列疏松，且肿胀变圆，镜下可见较多圆形空泡;与脾虚高脂组的大鼠肝脏细胞相比，香砂六君子汤高剂量治疗组和香砂六君子汤中剂量治疗组肝细胞排列紧密，肿胀程度减轻，圆形空泡明显减少。油红O染色结果显示：与正常对照组大鼠肝脏细胞相比，高脂组和脾虚高脂组肝脏细胞胞浆内有较多的红色脂滴蓄积;与脾虚高脂组大鼠肝脏细胞相比，香砂六君子汤中剂量治疗组和香砂六君子汤高剂量治疗组肝脏细胞红色脂滴沉积明显减少。 3、香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠肝脏和血清中细胞焦亡的相关蛋白的表达的影响 WesternBlot结果显示：与正常对照组相比，高脂组和脾虚高脂组的大鼠的肝脏中NLRP3、GSDMD、Caspase-1三个蛋白的表达程度显著增高(P＜0.05或P＜0.01);与脾虚高脂组相比，香砂六君子汤高剂量组和中剂量组中肝脏细胞中GSDMD蛋白均有不同程度的降低(P＜0.05或P＜001)。香砂六君子汤高剂量治疗组中的NLRP3、Caspase-1蛋白有不同程度的降低(P＜0.05或P＜0.01)，香砂六君子汤中剂量治疗组中NLRP3、Caspase-1蛋白的表达有明显的下降趋势，但没有统计学意义。ELISA结果显示：与正常对照组相比，高脂组和脾虚高脂组的大鼠肝脏和血清中IL-18和IL-1￡蛋白表达均有不同程度的升高(P＜0.01);与脾虚高脂组相比，香砂六君子汤高剂量治疗组和中剂量治疗组大鼠肝脏和血清中IL-18蛋白表达均有不同程度的降低(P＜0.05或P＜0.01)。香砂六君子汤高剂量治疗组大鼠肝脏和血清中的IL-1￡也有降低(P＜0.05或P＜0.01)，香砂六君子汤中剂量治疗组大鼠肝脏中IL-1￡蛋白的表达降低(P＜0.05)，虽然其血清中的IL-1￡蛋白的表达变化没有统计学意义，但是呈下降趋势。 4、香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠肝脏中细胞焦亡相关蛋白的mRNA的影响 RealtimeRT-PCR结果显示：与正常对照组相比，高脂组和脾虚高脂组大鼠的肝脏中的NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18和IL-1￡的蛋白的mRNA均有不同程度的升高(P＜0.01)，与高脂组和脾虚高脂组相比，香砂六君子汤中剂量治疗组和香砂六君子汤高剂量治疗组的大鼠的肝脏中的NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1￡的蛋白的mRNA均有不同程度的降低(P＜0.01);香砂六君子汤中剂量治疗组大鼠肝脏中IL-18的mRNA的表达变化没有统计学意义，但是呈下降趋势。 结论： 1、香砂六君子汤能够纠正脾虚高脂血症大鼠的血脂紊乱，改善其肝脏脂质沉积。 2、香砂六君子汤可能通过调控脾虚高脂血症大鼠肝脏中细胞焦亡相关基因及蛋白的变化，进而改善肝脏脂质沉积。
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