摘要
目的： (1)检测GGCT(γ-glutamylcyclotransferase，γ-谷胱甘肽环酰基转移酶)在结直肠癌旁正常、息肉、腺瘤和癌组织中的表达，研究GGCT在结直肠不同病变组织中的表达情况；(2)分析GGCT表达与结直肠癌(colorectal cancer，CRC)患者临床病理特征、生存预后的关系；(3)探究GGCT表达与结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭之间的关系；(4)检测GGCTmRNA在CRC组织中相对量的表达，利用目前世界上最大的肿瘤基因芯片数据库(Oncomin数据库)分析GGCT基因在结直肠癌中的表达，旨在验证GGCTmRNA的表达情况，为结直肠癌的诊断和治疗提供新的潜在靶点。 方法： (1)采用免疫组织化学(immunohistochemistry，IHC)方法检测30例结直肠息肉、36例腺瘤组织、229例癌组织和其中能收集到的167例癌旁正常石蜡组织中GGCT的表达水平，用Hi-score评分法和免疫反应积分法(Immune responseintegration，IRS)对染色结果分别进行判读，比较GGCT在不同结直肠病变组织中的表达是否存在差异，分析GGCT与CRC患者临床病理特征及生存预后的关系。 (2)采用IHC方法检测Ki-67、CyclinD1(G1/S-特异性周期蛋白-D1)、E-cadherin(E-钙黏蛋白)和Vimentin(波形蛋白)在结直肠癌旁正常组织和癌组织中的表达水平，分析GGCT与以上指标的相关性。 (3)应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction ，qRT-PCR)方法检测GGCTmRNA在结直肠癌旁正常和CRC石蜡组织中的相对表达量。 (4)利用目前世界上最大的肿瘤基因芯片数据库——Oncomin数据库分析GGCT基因在结直肠癌中的表达，验证GGCTmRNA的表达情况。 结果： (1)本实验中GGCT的IHC染色结果分两种判读方法进行 方法一：Hi-score评分法：GGCT在结直肠癌旁正常组织、息肉、腺瘤和癌组织中的阳性表达率分别为54.5%、70.0%、52.8%和77.7%，差异均无统计学意义(P＞0.05)。 方法二：免疫反应积分法(IRS)：GGCT定位于细胞浆和细胞核，IRS对胞浆、胞核染色分别进行了判读，结果显示：GGCT在结直肠癌旁正常组织、息肉、腺瘤和癌组织中的胞浆阳性表达率分别为75.4%、86.7%、77.8%和83.4%，差异均不具有统计学意义(P＞0.05)；GGCT在结直肠癌旁正常组织、息肉、腺瘤和癌组织中的胞核阳性表达率分别为74.3%、80.0%、72.2%和36.7%，GGCT在CRC和癌旁正常组织中胞核阳性表达率的差异具有统计学意义(P＜0.05)，其余表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。 (2)GGCT的胞核表达与CRC患者临床病理特征之间的关系 GGCT在细胞核的阳性表达率与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(P＜0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、神经侵犯及脉管侵犯无关(P＞0.05)。 (3)CRC组织中Ki-67、CyclinD1、E-cadherin和Vimentin的表达及其与临床病理特征之间的关系 Ki-67在癌旁正常组织和CRC组织中的阳性表达率分别为60.5%和77.7%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。Ki-67在CRC中的阳性表达率与肿瘤大小和TNM分期呈正相关(P＜0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、神经、脉管侵犯及分化程度无关(P＞0.05)。 CyclinD1在癌旁正常组织和CRC组织中的阳性表达率分别为12.0%和43.2%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。CRC患者CyclinD1阳性表达率与肿瘤大小呈负相关(P＜0.05)，与肿瘤部位相关，与淋巴结转移、脉管侵犯及TNM分期呈正相关(P＜0.05)，与性别、年龄及神经累犯无关(P＞0.05)。 E-cadherin在癌旁正常组织和CRC组织中的阳性表达率分别为100%和94.3%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。E-cadherin在CRC低分化癌中的阳性表达率为66.7%，在中高分化癌中的阳性表达率为95.5%。E-cadherin在CRC中的阳性表达率与淋巴结转移呈负相关(P＜0.05)，与分化程度呈正相关(P＜0.05)，与年龄、性别、神经、脉管侵犯及TNM分期等无关(P＞0.05)。 Vimentin在癌旁正常组织和CRC组织中的阳性表达率分别为0和6.6%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。Vimentin在CRC低分化癌中的阳性表达率为44.4%，在中高分化癌中的阳性表达率为5.0%，差异具有统计学意义(P＜0.05)。CRC患者Vimentin阳性表达率与淋巴结转移呈正相关(P＜0.05)，与分化程度呈负相关(P＜0.05)，与年龄、性别、神经、脉管侵犯及TNM分期等无关(P＞0.05)。 (4)GGCT胞核表达与Ki-67、CyclinD1的相关性分析 GGCT在CRC组织细胞核中的表达与Ki-67、CyclinD1的表达均具有明显的负相关性(r=﹣0.246，P=0.000；r=﹣0.225，P=0.001)，且Ki-67和CyclinD1在CRC中的表达具有明显的正相关性(r=0.276，P=0.000)。 (5)GGCT胞核表达与E-cadherin、Vimentin的相关性分析 GGCT在CRC组织细胞核中的表达与E-cadherin的表达呈现正相关趋势，但无统计学意义(r=0.030，P=0.651)；GGCT在CRC组织细胞核中的表达与Vimentin的表达呈现负相关趋势，但无统计学意义(r=﹣0.055，P=0.407)；E-cadherin和Vimentin在CRC组织中的表达具有明显的负相关性(r=﹣1.000，P=0.000)。 (6)CRC患者中GGCT胞核表达阴性组生存期低于阳性组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (7)GGCTmRNA在CRC组织中的相对表达量显著高于癌旁正常组织中的相对表达量，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (8)Oncomin数据库分析结果显示，GGCTmRNA在CRC组织中的表达量显著高于癌旁正常组织(P＜0.05)，与本实验GGCTmRNA检测结果一致。 结论： (1)Hi-score评分法：GGCT在结直肠癌旁正常组织、息肉、腺瘤和CRC组织中的表达没有差异。 (2)IRS：GGCT在结直肠癌旁正常组织和CRC组织中的表达的差异主要体现在细胞核上。GGCT在癌组织中的胞核表达率低于癌旁正常组织中的胞核表达率。 (3)Ki-67和CyclinD1在CRC组织中的表达率显著高于癌旁正常组织，肿瘤细胞增殖活性增加。GGCT的胞核表达与结直肠癌细胞增殖密切相关。 (4)E-cadherin和Vimentin的检测结果提示：上皮细胞-间充质转化(epithelial mesenchymal transition， EMT)可能存在于CRC病变的进展过程中。 (5)GGCTmRNA在CRC组织中的表达量显著高于癌旁正常组织，但GGCTmRNA与GGCT蛋白在CRC中的表达不一致。
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