摘要
目的：观察低氧条件下SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）骨桥蛋白(OPN)及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达，探讨低氧对自噬的影响；并通过OPN过表达及低表达慢病毒研究OPN对PASMCs细胞自噬及细胞增殖力的调控作用。 方法：细胞分为6组：常氧对照组（Normoxic）、低氧对照组（Hypoxia）、低氧+OPN干扰空病毒组（H+OPN EV）、低氧+OPN干扰慢病毒组（H+OPN shRNA）、低氧+OPN过表达空病毒组（H+OPN OEV）、低氧+OPN过表达慢病毒组（H+OPN shoRNA）。各组分别用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）阳性标记率法检测细胞增殖能力、流式细胞术分析细胞周期、Western Blot法检测OPN及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达，RT-PCR法检测自噬相关基因Beclin1、LC3B mRNA的表达。 结果：经低氧干预后OPN和自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达相较常氧组增高（p<0.05），细胞增殖力增强（p<0.05），促进细胞周期进入S期。低氧条件下慢病毒进行OPN RNA干扰后，与低氧对照组相比，低氧+OPN干扰慢病毒组，OPN蛋白表达量降低，Beclin1、LC3B蛋白表达量和mRNA都增高（p<0.05），细胞增殖能力减弱（p<0.05），细胞周期阻滞于G0/G1期；低氧条件下细胞经OPN过表达处理后，与低氧对照组比较，OPN过表达组OPN蛋白表达增高，自噬相关蛋白Beclin1、LC3B表达量降低（p<0.05），自噬相关基因LC3B的mRNA表达增强（p<0.05），Beclin1的mRNA未改变（p>0.05）；细胞增殖能力和细胞周期无变化（p>0.05）。 结论：低氧可使PASMCs OPN表达量增加，细胞自噬力和细胞增殖力增强；且OPN可促进低氧条件下PASMCs细胞增殖并负向调控细胞自噬。
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