摘要
目的： 本研究在针刺治疗周围性面瘫疗效确切的前提下，探讨细胞自噬、GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路在针刺促进面神经损伤修复中的作用，拟揭示针刺治疗该病的自噬机制，以期为临床治疗提供科学依据。 方法： 实验一：选取雄性SD大鼠60只，随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组、针+3-MA组，每组12只。采用面神经压榨法制备面神经损伤大鼠模型。于术后1天针刺患侧地仓、颊车、翳风、合谷穴，电针10min后留针20min，总治疗时间30min，每日1次，连续治疗5天为1个疗程，疗程之间间隔2天，共治疗2个疗程。采用Simone10分法分别于术后1天、4天、7天、10天和13天进行行为学评分，评估面神经功能损伤及恢复情况，治疗结束后切取患侧面神经组织，运用HE染色法观察其形态学改变，采用免疫组化法、免疫荧光法和RT-PCR技术检测自噬水平。 实验二：选取雄性SD大鼠60只，随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组、针+GDNF拮抗剂组，每组12只。模型制备及针刺操作同实验一。采用Simone10分法评估面神经功能恢复情况，治疗结束后切取面神经组织，运用免疫组化法检测GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路的表达水平。 结果： 1.行为学评分 与空白组比较，假手术组行为学评分无统计学差异(均P＞0.05)；与假手术组比较，模型组评分显著降低(均P＜0.01)。术后第2周，与模型组比较，针刺组评分升高(P＜0.05，P＜0.01)；与针刺组比较，针+3-MA组和针+GDNF拮抗剂组评分降低(均P＜0.05)。 2.面神经形态学观察 镜下观察到空白组和假手术组面神经形态结构基本正常，无明显病理损伤；模型组面神经形态结构损伤，神经纤维固有的束状结构崩解消失，呈丝网状结构甚至空环状结构；针刺组面神经纤维肿胀变性，但排列较整齐；针+3-MA组面神经形态结构不完整，部分轴突和髓鞘呈点片状丧失。 3.自噬水平检测 与空白组比较，假手术组Beclin1蛋白、LC3蛋白和LC3mRNA表达水平无统计学差异(均P＞0.05)；与假手术组比较，模型组Beclin1蛋白、LC3蛋白和LC3mRNA表达水平显著升高(均P＜0.01)，P62蛋白及其mRNA表达水平显著降低(均P＜0.01)；与模型组比较，针刺组Beclin1和LC3的蛋白表达水平明显降低(均P＜0.01)，P62蛋白及其mRNA表达水平明显升高(均P＜0.01)，而LC3mRNA表达水平呈降低趋势(P＞0.05)；与针刺组比较，针+3-MA组Beclin1蛋白、LC3蛋白和LC3mRNA表达水平降低(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01)。 4.GDNF及PI3K-Akt-mTOR信号通路检测 与空白组比较，假手术组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平无统计学差异(均P＞0.05)；与假手术组比较，模型组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平显著降低(均P＜0.01)；与模型组比较，针刺组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平明显升高(均P＜0.01)；与针刺组比较，针+GDNF拮抗剂组GDNF、Rai、PI3K和mTOR的蛋白表达水平显著降低(均P＜0.01)。 结论： 1.针刺可改善面神经运动功能和组织形态结构，从而促进面神经损伤的修复。 2.针刺可能通过促进GDNF表达，激活PI3K-Akt-mTOR信号通路，下调Beclin1及LC3的表达并上调P62的表达，抑制自噬水平，进而改善面神经运动功能，抑制GDNF的表达后，针刺对面神经运动功能的改善作用不明显。
NETL