摘要
目的：研究杨桃根提取物2-十二烷基-6-甲氧基-2，5-二烯-1，4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione，DMDD)对4T1乳腺癌细胞和BEL-7404肝癌细胞的抗肿瘤作用以及对MAPK信号通路的影响。 方法: 1.抗乳腺癌部分：体外培养4T1乳腺癌细胞，给予不同浓度的DMDD处理后，采用MTT法、克隆形成实验检测DMDD对4T1细胞增殖的影响；采用AO/EB双染色法观察DMDD对4T1细胞凋亡的影响；通过流式细胞术检测DMDD对4T1细胞周期的影响；分别通过划痕实验、Transwell小室法检测DMDD对4T1细胞迁移和侵袭能力的影响；通过PCR、WB检测相关基因和相关蛋白的表达水平。 2.抗肝癌部分：体外培养BEL-7404肝癌细胞，给予不同浓度的DMDD处理后，采用MTT法、克隆形成实验检测DMDD对BEL-7404细胞增殖的影响；采用AO/EB双染色法观察DMDD对BEL-7404细胞凋亡的影响；通过流式细胞术检测DMDD对BEL-7404细胞周期的影响；分别通过划痕实验、Transwell小室法检测DMDD对BEL-7404细胞迁移和侵袭能力的影响；通过PCR、WB检测相关基因和蛋白的表达水平。 结果： 1.抗乳腺癌部分:MTT法结果显示：DMDD可抑制4T1细胞的增殖，且呈明显的剂量与时间依赖性，差异均有统计学意义(均P<0.01)。克隆形成实验显示：DMDD可抑制4T1细胞集落的形成，且具有剂量依赖性，差异均具有显著性(P<0.01)。AO/EB双染色法观察到DMDD可显著诱导4T1细胞发生凋亡。流式细胞术检测细胞周期结果显示：与对照组相比，随着DMDD浓度的增加，4T1细胞在G1期的细胞数量逐渐增多，S/G2期的细胞数量逐渐减少，差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。划痕实验结果显示：与空白对照组相比，3个浓度实验组的细胞迁移率明显下降，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示：与空白对照组相比，3个浓度实验组的侵袭细胞数明显下降，差异均有统计学意义(均P<0.01)。RT-PCR实验结果显示：与空白对照组相比，DMDD剂量组的raf1、mek1、mek2、erk1、erk2、bcl2基因表达显著下调(P<0.05或P<0.01)，DMDD剂量组的bax基因表达显著上调(P<0.01)并且呈剂量依赖性。WB实验结果显示：与空白对照组相比，DMDD剂量组的p-RAF1、p-MEK、p-ERK、p-p38、Bcl2、MMP2、andMMP9蛋白表达下调，DMDD剂量组的p-JNK、Bax蛋白表达上调，差异均具有统计学意义(P<0.05或P＜0.01)，且呈剂量依赖性。 2.抗肝癌部分：MTT法结果显示：DMDD可抑制BEL-7404细胞的增殖，且呈明显的剂量与时间依赖性，差异均有统计学意义(均P<0.01)。克隆形成实验显示：DMDD可抑制BEL-7404细胞集落的形成，且具有剂量依赖性，差异均具有显著性(P<0.01)。AO/EB双染色法观察到经DMDD干预后可显著诱导BEL-7404细胞发生凋亡现象。流式细胞术检测细胞周期结果显示：与空白对照组相比，随着DMDD浓度的增加，BEL-7404细胞在G1期的细胞数量逐渐增多，S/G2期的细胞数量逐渐减少，差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。划痕实验结果显示：与空白对照组相比，3个浓度实验组的细胞迁移率明显下降，，差异均有统计学意义(P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示：与空白对照组相比，3个浓度实验组的侵袭细胞数明显下降，差异均有统计学意义(均P<0.01)。RT-PCR实验结果显示：与空白对照组相比，DMDD剂量组的raf1、mek1、mek2、erk1、erk2、bcl2基因表达显著下调(P<0.05或P<0.01)，DMDD剂量组的bax基因表达显著上调(P<0.01)并且呈剂量依赖性。WB实验结果显示：与空白对照组相比，DMDD组的p-RAF1、p-MEK、p-ERK、p-p38、Bcl2、MMP2蛋白表达下调，DMDD剂量组的p-JNK、Bax蛋白表达上调，差异均具有统计学意义(P<0.05或P＜0.01)，且呈剂量依赖性。 结论：DMDD可抑制4T1乳腺癌细胞和BEL-7404肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭，促进4T1乳腺癌细胞和BEL-7404肝癌细胞的凋亡，并引起它们的G1期细胞阻滞，其机制可能与MAPK信号通路相关。
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