摘要
第一部分hnRNPH1在机体中的表达模式研究 【目的】对不同物种hnRNPH1蛋白氨基酸序列进行保守性分析，并检测hnRNPH1在小鼠多种组织器官中的表达水平以及细胞定位情况。 【方法】利用生物信息学对人、小鼠、大鼠、狗和鸡等不同物种的hnRNPH1氨基酸序列进行多重比对和系统发育树分析，同时通过RT-qPCR，WesternBlot和免疫荧光等技术探索hnRNPH1在小鼠多种组织器官以及生精小管内各类细胞中的表达情况。 【结果】hnRNPH1蛋白在不同物种中具有高度保守性，其中在人和小鼠中有高达99.78%的同源性(仅有一个氨基酸不同)。hnRNPH1在小鼠睾丸中富集，并且定位于生殖细胞和支持细胞的细胞核。 【结论】hnRNPH1在物种间的保守性较高，主要定位在哺乳动物生殖细胞及支持细胞的细胞核。 第二部分hnRNPH1在小鼠生殖细胞中条件性敲除对精子发生的影响研究 【目的】阐明生殖细胞中hnRNPH1在精子发生中的生理作用。 【方法】利用Stra8-Cre小鼠构建生殖细胞条件性敲除hnRNPH1小鼠模型。通过生育率分析和形态学检测等方法探索生殖细胞中hnRNPH1在精子发生中的生理作用。 【结果】成功构建Stra8-Cre介导的条件性敲除出生后生殖中hnRNPH1的小鼠模型，敲除小鼠睾丸明显变小，精子发生受损。 【结论】生殖细胞中hnRNPH1在精子发生过程中发挥重要功能。 第三部分hnRNPH1在小鼠睾丸支持细胞中条件性敲除对精子发生的影响研究 【目的】阐明睾丸支持细胞中hnRNPH1在精子发生中的生理作用及其调控机制。 【方法】利用Amh-Cre工具小鼠构建特异性敲除睾丸支持细胞中hnRNPH1小鼠模型。通过生育力检测、免疫荧光、凋亡检测、超微结构分析、RNA-seq和RIP-qPCR等方法探索睾丸支持细胞中hnRNPH1在精子发生中的作用和功能。 【结果】顺利构建Amh-Cre介导的睾丸支持细胞特异性敲除hnRNPH1小鼠，该小鼠睾丸显著变小，生育力丧失，生精小管直径变小,附睾内未观察到成熟精子，血睾屏障遭到破坏，睾丸支持细胞内自噬水平显著上升。细胞连接相关基因的mRNA能够被hnRNPH1蛋白结合，且在敲除小鼠睾丸中表达异常。 【结论】睾丸支持细胞中的hnRNPH1在精子发生过程中发挥重要功能，其缺失导致细胞连接相关基因表达异常，进而造成血睾屏障异常和睾丸支持细胞的正常生物学功能障碍，最终影响生精小管内的微环境，致使小鼠雄性个体的生精过程受到严重影响而导致不育。
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