摘要
目的：胆管癌（CCA）和胆囊癌（GBC）属于胆道恶性肿瘤，5年生存率低而复发率高。CCA和GBC患者缺乏早期诊断的循环生物标志物。细胞外囊泡，尤其是外泌体，由于其简单、快速的可获得性，已成为有希望的恶性肿瘤诊断标志物来源。因此，外泌体微小核糖核酸（miRNAs）和PIWI相互作用核糖核酸（piRNAs）的鉴定为CCA和GBC的早期诊断提供了新的策略。 方法：本研究入选了2017年8月至2017年12月在中国人民解放军总医院肝胆外二科就诊并接受手术治疗的胆系恶性肿瘤患者。根据患者临床表现和手术病理，实现了明确诊断，且手术治疗方式为根治性切除手术。本研究排除了合并其它肿瘤病史、长期慢性病史和长期药物服用史的患者。对5例CCA患者和4例GBC患者术前1天和术后7天及所有健康个体均采集外周全血约20ml并提取外泌体。提取的血浆外泌体通过透射电子显微镜（Hitachi）鉴定，应用NanoSight LM10-HS纳米颗粒分析仪（Malern）对外泌体进行质量评价。然后，对外泌体内RNAs进行第二代深度高通量测序分析，并在健康个体50例、CCA患者40例和GBC患者25例中进行测序结果的验证。 结果：与正常对照组相比，CCA患者的外泌体中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p和miR-4732-3p水平显著上调。然而，GBC患者外泌体中miRNAs的验证结果与测序结果不一致。Ⅱ期CCA患者的外泌体中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p和miR-4732-3p的水平最高。此外，手术后CCA患者的外泌体中miR-151a-5p、miR-191-5p和miR-4732-3p水平下降。另一方面，Ⅲ期GBC患者的外泌体中miR-182-5p、miR-191-5p和miR-192-5p的水平最高。然而，这些miRNAs在患者完成手术后仍然很高。MiR-9-3p、miR-129-5p、miR-218-5p、miR-433-3p、nc_000001.11-1920和nc_000010.11-20947水平在CCA和GBC患者的外泌体中均显著下调。CCA患者的外泌体中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p和miR-4732-3p水平显著升高，而GBC患者的外泌体中miR-151a-5p水平轻度升高。在CCA和GBC血浆中，外泌体piR-2660989、piR-10506469、piR-20548188、piR-10822895、piR-hsa-23209和piR-18044111均上调。在健康个体50例，CCA患者40例，GBC患者25例中，CCA和GBC患者血浆外泌体中piR-10506469水平均显著升高。此外，手术后CAA患者和GBC患者的外泌体中piR-10506469和piR-20548188水平明显降低。 结论：在CCA患者和GBC患者血浆中差异表达的多种外泌体miRNAs和piRNAs可以作为早期诊断CCA和GBC的潜在生物标志物。
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