摘要
目的旨在探究四次跨膜蛋白1(transmembrane 4 superfamily member 1， TM4SF1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)中的表达情况，并且尝试明确其与NSCLC病人临床病理表征内在的联系。搭建过表达TM4SF1的慢病毒表达载体，利用其转染肺癌A549细胞，探讨其与肺癌细胞A549迁移功能的产生的作用及在肺癌A549细胞株中通过JAK2-STAT3信号通路对下游Sox2表达水平的影响。 方法收集61例NSCLC病人手术切除的癌组织、相应的癌旁组织以及因良性肺部疾病切除的正常肺组织10例(2018年6月-2018年12月)。分别提取癌组织、癌旁组织及良性肺组织内的mRNA，合成cDNA后利用实时免疫荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定mRNA层次TM4SF1的表达情况，探究TM4SF1在不同新鲜标本中RNA表达量的差别及与不同表达层次与临床病理的关联。利用Westernblot法测定癌组织、癌旁组织及良性肺组织中蛋白层次TM4SF1的表达，探究其表达差异的意义。在肺癌A549细胞中使用慢病毒转染手段过表达TM4SF1基因。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及WesternBlot实验测定目的基因TM4SF1的成功表达，TM4SF1高表达使A549迁移能力发生的变化则应用Transwell法进行检测。加入JAK2-STAT3信号通路干扰试剂AG490后应用实时免疫荧光定量PCR(qRT-PCR)法分析转染组、空白组、阴性对照组及其相应处理组TM4SF1、JAK2-STAT3信号通路中Stat3及下游Sox2基因的RNA表达水平。同时分析这三个指标的关联性。 结果在新鲜标本内对TM4SF1表达的研究说明，癌组织中mRNA水平TM4SF1的表达高于对应的癌旁组织，mRNA水平的癌组织TM4SF1表达量为癌旁组织的±4.90倍，表达水平的差别具有统计学意义(t=5.752，P<0.05)；且明显高于正常的肺组织标本,为正常肺组织的±5.17倍(t=3.541，P=0.001<0.05)，而mRNA层次的癌旁组织与良性肺组织的TM4SF1的表达无显著差别(P＞0.05)。mRNA层面TM4SF1的表达与患者的分化程度、肿块大小、淋巴结阳性率的高低、临床分期有较为紧密的联系(P<0.05)，TM4SF1mRNA的高表达可能表现出更高的淋巴结阳性率倾向和较晚期的临床分期。而mRNA水平的TM4SF1表达与病人年龄及性别则尚未表现出显著的关联(P>0.05)。TM4SF1在肺癌细胞A549中成功过表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western-blot法检测转染组TM4SF1的表达水平，转染组的TM4SF1、Sox2及Stat3的mRNA表达显著高于阴性对照组(P<0.01)及空白组(P<0.01)，且转染组的TM4SF1蛋白表达水平显著高于阴性对照组及空白组(P=0.001＜0.01)，在培养基中添加JAK2-STAT3信号通路干扰试剂AG490后继续培养三组细胞，药物干扰组细胞Stat3及下游Sox2表达水平较未处理组显著减低(P＜0.05)，说明JAK2-STAT3可能是TM4SF1调节其下游Sox2表达水平的信号通路。在过表达TM4SF1后利用Transwell验证肺癌A549细胞的运动增强，结果显示其迁移水平有显著提高。TM4SF1、Stat3及Sox2在mRNA水平的表达呈现正相关趋势(P＜0.01)。 结论在NSCLC中TM4SF1呈现高表达趋势，且肿块越大，其分化程度越低下，相应的淋巴结阳性率越多及临床分期较晚，在mRNA层面TM4SF1的表达偏高，让我们对NSCLC的恶性程度分级有了新标准。该基因过表达后可以明显上调肺癌A549细胞的迁移水平，且可能通过JAK2-STAT3通路影响甚至上调下方Sox2表达。TM4SF1、Stat3及Sox2三者在A549细胞中表达呈正相关。这条通路可能是TM4SF1通过促进NSCLC 的发生发展及远处转移的关键通路，预示着在NSCLC的发生发展中TM4SF1可能起着重要的作用，并有希望充当癌症治疗的新靶点。
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