摘要
目的：为了筛选在SLE患者及健康人间差异表达的circRNA，并初步探究SLE患者中差异表达的circRNA形成的分子遗传机制。 方法：1.在筛选阶段，以3例新发SLE患者及4例健康对照的PBMC为研究对象，采用高通量测序筛选在SLE患者及健康对照间差异表达的circRNA，并对差异表达的circRNA进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。2.在验证阶段，选取SLE患者31例作为病例组(SLE组)、健康志愿者35例作为健康对照组(HC组)。采用RT-qPCR检测PBMC中hsa_circ_0007683、hsa_circ_0042519、hsa_circ_0008647、hsa_circ_0006689、hsa_circ_0070562及hsa_circ_0006117的表达水平，并将其与临床参数(包括SLEDAI评分、WBC、RBC、PLT、C3、C4、24h尿蛋白、ANA、抗dsDNA抗体、Sm抗体及AnuA)进行相关性分析。采用受试者工作特征曲线(ROC)评价circRNA作为诊断指标的临床价值。3.在初步探究circRNA形成的分子遗传机制阶段，纳入174例SLE患者与176例健康对照，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分型技术对hsa_circ_0006689两侧翼内含子Alu元件进行SNP检测，进行等位基因和基因型频率分布、连锁不平衡及单倍型分析。 结果：1.筛选出362个在SLE患者与健康对照间差异表达的circRNA，其中167个显著上调，195个显著下调；GO分析提示这些差异表达的circRNA来源基因主要在细胞质中分布，通过影响蛋白质、RNA参与蛋白质等大分子相关的代谢、修饰；KEGG分析提示差异表达的circRNA来源基因主要富集在赖氨酸降解、肿瘤错误转录、B细胞受体信号通路等通路中。2.(1 )与健康对照相比，hsa_circ_0007683、hsa_circ_0042519、hsa_circ_0008647在SLE患者PBMC中均表达升高(P＜0.05)，hsa_circ_0006689在SLE患者PBMC中表达降低(P＜0.05)。hsa_circ_0070562和hsa_circ_0006117在SLE患者与健康对照PBMC中表达的差别无统计学意义(均P＞0.05)。(2 )相关性分析提示PBMC中hsa_circ_0006689与SLEDAI评分有相关性(P<0.05)，而与WBC、RBC、PLT、C3、C4、24h尿蛋白、ANA、抗dsDNA抗体、Sm抗体、AnuA等指标无相关性(P>0.05)。hsa_circ_0007683、hsa_circ_0042519、hsa_circ_0008647与以上临床参数均无相关性(P>0.05)。(3)ROC分析显示在区分HC组与SLE组时hsa_circ_0008647、hsa_circ_0006689的AUC面积分别为0.911(敏感性为93.55%，特异性为74.29%，P＜0.001)和0.736(敏感性为51.61%，特异性为88.57%，P＜0.001)。联合hsa_circ_0008647检测能使ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA区分HC组和SLE组的敏感性分别从96.77%、29.03%、32.26%、32.26%提高到100.00%、83.87%、80.65%、80.65%(均P<0.001)，与单独使用抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA检测HC组和SLE组相比，联合检测可提高这三个指标区分HC组和SLE组的敏感性(均P＜0.001)，而与单独使用ANA检测HC组和SLE组相比，ANA联合hsa_circ_0008647后可提高ANA区分HC组和SLE组的敏感性，但无统计学意义(P＞0.05)。联合hsa_circ_0006689检测能使抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及AnuA区分HC组和SLE组的敏感性提高到61.30%、71.00%、67.70%，联合前后差异具有统计学意义(P<0.05)；当hsa_circ_0006689与ANA联合检测HC组和SLE组时，可将ANA的敏感性从96.77%略微提高到96.80%，但与ANA联合前相比无统计学意义(P>0.05)。3.(1)rs10847698、rs11610968、rs12813317、rs144234620、rs186471269、rs4760536和rs4760537这7个位点准确测出。(2)rs10847698位点的基因型T/C、等位基因C在SLE组中富集(P<0.05)，rs4760537位点的C/A基因型在SLE组富集(P<0.05)，可能是SLE的危险因素。(3)连锁不平衡分析结果显示rs10847698、rs11610968、rs4760536和rs4760537之间存在较高的连锁不平衡关系；(4 )单倍型分析提示rs10847698、rs11610968、rs12813317、rs144234620、rs186471269、rs4760536和rs4760537等位点组成的C-G-G-C-C-C-C单倍体基因型在SLE组中富集(P<0.05)。 结论：1.在SLE患者及健康人间具有大量差异表达的circRNA，这些差异表达的circRNA与蛋白质等大分子相关的代谢、修饰相关。2.hsa_circ_0008647在SLE的PBMC中表达显著升高，ROC分析显示hsa_circ_0008647在区分SLE患者及健康人时具有较高的敏感性；hsa_circ_0006689在SLE患者的PBMC中表达明显降低，与SLE患者的SLEDAI评分相关。由此推测hsa_circ_0008647与hsa_circ_0006689分别在SLE的诊断和评估病情方面，具有作为分子标志物的潜力。3.hsa_circ_0006689两侧翼Alu元件上的rs10847698与rs4760537在SLE患者与健康人中存在差异，可能与hsa_circ_0006689环化效率差异相关，值得进一步探究。
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