摘要
近年来酒精性肝病(Alcoholic liver disease ， ALD)威胁着人类生命健康，而拮抗酒精氧化应激的抗氧化成分是预防和治疗ALD的研究重点。余甘子(Phyllanthus emblica L. , PE)作为传统药食同源植物，富含多酚类物质，抗氧化活性显著。余甘子干果被用作治疗肝损伤，余甘子多酚(PPE)的保肝活性在许多文献中也有报道。本文主要从以下几个方面对余甘子中多酚类活性成分进行研究： 1、采用溶剂浸提法提取PPE，通过福林酚比色法测定多酚含量，以总多酚含量为指标，采用单因素实验确定对多酚提取影响较大的3个指标，即：浸提时间、浸提温度、乙醇浓度，进一步通过正交试验优化提取方案；结果显示没食子酸(Gallic acid， GA)在1～5mg/mL范围内线性关系良好，线性回归方程为：y=0.1431x+0.0791(r=0.9997)；PPE最佳提取方案是：提取时间为135min，浸提温度为70℃，溶于45%的乙醇，此条件下的总多酚含量为0.24mgGAE/mg。 2、建立HPLC测定PE中GA、柯里拉京(Corilagin， CO)、鞣花酸(Ellagic acid，EA)三种多酚单体物质的含量的方法，并对不同产地的PE进行比较。采用InertsilODSC18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，A、B流动相分别为乙腈和0.1%三氟乙酸，以1mL/min的流速梯度洗脱35min，于254nm处测定。在此条件下，PE中的GA、CO、EA分离效果良好、仪器精密度好、稳定性良好、重复性高、回收率高。PE中GA、CO、EA综合含量从高到低的产地依次为：漳州、凉山、潮汕、昆明、玉林。 3、从总还原力、DPPH·清除率、·OH清除率、自发性肝脂质氧化抑制比较不同产地PE的抗氧化活性，并研究抗氧化活性与活性物质含量的相关性。在抗氧化活性研究中，昆明的PE总还原能力较高；凉山的PE对DPPH·和·OH清除能力较好，EC50分别为7.46μg/mL和0.44mg/mL，且对自发性肝脂质氧化抑制能力优于其它产地。PE中的GA、CO、EA含量与抗氧化活性具有相关性，对抗氧化活性的贡献依次为：CO＞EA＞GA；其中CO的含量和DPPH·的清除能力相关性极显著(r=0.964)，EA的含量和DPPH·的清除能力相关性显著(r=0.933)，GA的含量与自发性肝脂质氧化抑制能力相关性显著(r=0.895)。通过综合比较，PPE含量、GA、CO、EA含量、抗氧化活性相对较好的为凉山产地的余甘子。 4、研究PPE对酒精性肝损伤的保护作用，及核因子相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路在其中的调节作用。建立BRL-3A细胞酒精性损伤模型，用试剂盒检测PPE干涉前后细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST )、谷胱甘肽(GSH )的含量；用Q-PCR法检测Nrf2和HO-1的mRNA表达水平，Western印迹法检测BRL-3A细胞中蛋白含量。结果表明：PPE可以降低MDA、ALT、AST含量、升高SOD和GSH水平；降低Nrf2的mRNA水平和蛋白质含量，阻止Nrf2的过度表达；上调HO-1的mRNA水平和蛋白质含量，有利细胞中抗氧化酶基因HO-1的表达，增强其自身抗氧化能力，抑制酒精性肝细胞氧化损伤。PPE可通过调控Nrf2/HO-1信号通路抑制酒精性肝细胞损伤，其主要作用成分为GA、CO和EA。
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