摘要
目的： 特应性皮炎是一种慢性炎症性、瘙痒性皮肤病，婴幼儿起病，发病率高，严重影响患者生活质量。其发病机制与搔抓刺激、微生物定植和皮肤屏障受损有关。对于特应性皮炎的治疗，口服药由于困倦、嗜睡等不良反应难以维持长期应用，西药外用制剂又常受到不良反应和价格高等局限。因此，中药外治对特应性皮炎具有重要意义。而促进药物的透皮吸收，是中药外治的关键问题，中药獾油渗透力强，是良好的透皮载体，且能促进创面愈合，可能兼具修复皮肤屏障的功效。因此，本研究受特应性皮炎代表性方剂润肤消炎的启发选用黄柏、金银花、防风配伍成新的润肤消炎洗剂，再与獾油配伍，即自拟獾油搽剂，通过动物模型、体外抑菌实验和分子生物学手段等探讨其对特应性皮炎的疗效和安全性，并阐明作用机制，为自拟獾油搽剂作为一种疗效好、副作用小、价格合理的新型中药制剂的临床应用提供理论依据。 方法： 首先，构建小鼠特应性皮炎模型。购买6-8周SPF级雌性balb/c小鼠20只，随机分为空白对照组（不造摸）、模型组（造模成功后即处死）、阴性对照组（造模成功后不予外用药物）、阳性对照组（外用丁酸氢化可的松）和治疗组（外用自拟獾油搽剂），每组4只。背部皮肤脱毛后用卵清蛋白反复致敏法造模，并通过组织病理改变和血清总IgE检测验证造模成功。随后，通过该模型观察自拟獾油搽剂对特应性皮炎的疗效和不良反应。造模成功后，各组小鼠予相应药物外用，一天两次，一周后肉眼观察各组小鼠背部的皮损改善情况和不良反应，同时取皮损病理活检观察各组小鼠皮损治疗后的病理改变，并摘眼取血用ELISA法检测血清总IgE水平，以评价各组小鼠特应性皮炎的改善情况。其次，通过小鼠特应性皮炎模型，观察自拟獾油搽剂对模型小鼠皮肤屏障的修复作用及其机制。通过组织病理切片观察各组小鼠皮肤屏障情况，通过免疫组织化学染色和real-time PCR检查各组小鼠皮损中丝聚合蛋白FLG的表达水平，以探讨自拟獾油搽剂修复皮肤屏障的作用机制。最后，体外培养金黄色葡萄球菌，采用纸片法，观察自拟獾油搽剂及其各组分对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。 结果： 造模小鼠与空白对照组相比，背部逐渐出现红斑、水肿、干燥、脱屑、糜烂、出血和结痂等皮炎症状，模型组小鼠HE染色可见角化过度伴角化不全，表皮结痂，表皮细胞间水肿，可见细胞间桥，血管周围可见淋巴细胞浸润，小鼠血清总IgE较空白对照组升高，差异具有统计学意义（P＜0.05），提示造模成功。治疗后，阴性对照组小鼠背部皮损减轻，仍可见少许水肿，脱屑较治疗组明显，组织病理见细胞间水肿；阳性对照组小鼠背部皮损减轻，但仍可见脱屑，组织病理示细胞水肿减轻但表皮明显变薄；治疗组小鼠背部皮损减轻，仍可见少许脱屑，未见红斑、水肿等不良反应，组织病理见细胞间水肿减轻，表皮厚度未见变薄等不良反应；各组血清总IgE均有不同程度下降，阳性对照组、治疗组与阴性对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。组织病理观察皮肤屏障的结果显示，模型组表皮角化过度、表皮增厚，阴性对照组表皮较模型组略薄，阳性对照组表皮较空白对照组明显变薄，而治疗组表皮较模型组变薄，提示模型组表皮屏障受损，阳性对照组表皮屏障功能亦受损，而治疗组皮肤屏障有所改善。免疫组化及染色面积分析结果显示，空白对照组小鼠FLG在表皮角质层表达，模型组和阴性对照组角质层FLG表达减少，阳性对照组FLG表达较阴性对照组减少，治疗组角质层FLG表达较阴性对照组增加，上述差异均有统计学意义（P＜0.05）。Real-time PCR检测各组小鼠皮损组织的FLG表达情况与上述免疫组化结果一致，提示自拟獾油搽剂修复皮肤屏障可能与促进FLG表达有关。体外抑菌实验结果显示，黄柏和自拟獾油搽剂对金葡菌有较明显的抑制作用，抑菌圈直径（d/mm）分别为19.00±0.71mm和10.11±0.78mm；而防风，金银花及獾油无明显抑制作用。 结论： 自拟獾油搽剂对小鼠特应性皮炎模型有一定治疗作用，无明显不良反应。其作用机制可能与降低血清IgE浓度、促进FLG表达修复皮肤屏障和抑制金黄色葡萄球菌生长有关。
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