摘要
本课题借助体外肝肾细胞模型和在体动物模型确定蒺藜生物碱提取物和大孔树脂的70%乙醇洗脱物具有肝肾毒性。基于HPLC-ELSD和模拟炮制技术研究蒺藜70%乙醇洗脱物中化合物含量变化规律，结果发现随着炮制温度和炮制时间的增加terrestrosin D含量显著下降，hecogenin含量显著升高，terrestroside B和terrestrosin K含量先升高后降低。采用UHPLC-Q-TOF/MS技术结合多元统计分析和t检验，共鉴定出30个对区分生炒蒺藜具有贡献意义的甾体皂苷，具有规律的是蒺藜炒制后呋甾皂苷（含C-22-OH）和螺甾皂苷的峰强度显著减弱（P＜0.01或0.05），呋甾皂苷（含C-20-C-22位双键）和甾体皂苷元的峰强度显著增加（P＜0.01或0.05）；运用LC-MS/MS技术同时测定生炒蒺藜中9种甾体皂苷的含量，进一步证实了该发现。以体外肝肾细胞模型检测蒺藜单体化合物的肝肾毒性，结果发现螺甾皂苷terrestrosin D和25R-tribulosin具有明显的肝肾细胞毒性，呋甾皂苷tribuluside A、terrestroside B、terrestrosin K和甾体皂苷元hecogenin、tigogenin未表现出肝肾毒性，推断螺甾皂苷是蒺藜中的肝肾毒性成分。通过螺甾皂苷terrestrosin D和25R-tribulosin单体化合物的模拟炮制探讨了炮制过程中毒性物质转化机制：terrestrosin D和25R-tribulosin在加热炮制过程中发生脱糖反应，脱糖反应优先发生于糖链的末端糖，随后由外向内依次脱去糖链上的多个糖基，最后生成相应苷元。综上所述，本课题研究发现螺甾皂苷terrestrosin D和25R-tribulosin是蒺藜中的肝肾毒性成分，在蒺藜炒制过程中可转化为几乎无肝肾毒性的甾体皂苷元。螺甾皂苷的“脱糖减毒”是蒺藜炒制降低肝肾毒性的因素之一。本课题的研究将为蒺藜炒制减毒的科学性提供依据，进一步丰富“生毒熟减”的炮制理论，同时有利于筛选蒺藜的炮制工艺、完善蒺藜生炒品的质量标准，保证蒺藜临床用药的有效性和安全性。
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