黑枸杞花青素通过AMPK/ACC1通路促进C57BL/6小鼠白色脂肪棕色化引起的自适应产热

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中文摘要：棕色脂肪组织的主要功能是将其化学能转化为热能，用以维持体温的恒定，白色脂肪组织的主要功能是贮存能量，以甘油三酯的形式，而棕色脂肪与白色脂肪的最主要区别在于棕色脂肪可以通过产热来消耗能量，因此探讨如何促进白色脂肪棕色化是很有必要的。目的：研究黑枸杞花青素（AC）与冷刺激及结合作用通过AMPK/ACC1信号通路对小鼠白色脂肪组织棕色化引起的自适应产热的影响，探讨AC与冷暴露促进白色脂肪转化为棕色脂肪组织的作用，为肥胖及其相关的疾病提供一定的理论基础。方法：将40只C57BL/6小鼠随机分为4组，分别为正常室温组（Ⅰ组：23℃），正常冷刺激组（Ⅱ组，4℃），正常室温+花青素组（Ⅲ组，23℃，40mg/kg)，正常冷刺激+花青素组（Ⅳ组，4℃，40mg/kg)，进行相应指标检测： 1.小鼠体重、摄食量、脂肪与肝脏重量百分比、葡萄糖与胰岛素耐受以及血脂四项、细胞形态学的变化； 2.RT-PCR检测脂肪相关因子UCP1、PGC-1α、PRDM16、PPARγ、DiO2、Leptin、Cidea的mRNA的表达水平， 3.Western Blot检测脂肪因子UCP1、PGC-1α、FABP4、Leptin的蛋白水平的表达； 4.免疫组织化学检测脂肪因子UCP1、PGC-1α、FABP4、Leptin表达的影响； 5.Western Blot检测 AMPK/ACC1通路关键因子 p-AMPKα、AMPKα、p-ACC、ACC的蛋白表达水平的变化。结果： 1. AC与冷刺激以及结合作用对小鼠作用时均可以抑制体重的增长；冷刺激可增加小鼠的摄食量，AC可抑制小鼠的摄食量；脂肪与肝脏重量所占百分比实验中，AC、冷刺激与结合作用时均可下调白色脂肪的重量，增加棕色脂肪的所占的比例，减少白色脂肪的生成（P<0.05）；在葡萄糖耐受与胰岛素抵抗实验中，AC、冷刺激与结合作用均可改善小鼠的葡萄糖耐受与胰岛素敏感性；在血脂四项实验的检测中发现 AC与冷刺激以及结合作用极显著下调 TG和 LDL-C血液含量（P<0.01），AC与冷刺激显著下调T-CHO，上调HDL-C（P<0.05）；通过观察HE染色的结果发现，AC与冷刺激及结合作用使出现棕色脂肪的特征；用扫描电镜对棕色脂肪组织观察，用AC与冷刺激及结合处理后，脂肪细胞逐渐出现纤维束交缠在一起的现象。 2.通过RT-PCR技术检测脂肪相关因子发现，在iWAT中，AC极显著上调Cidea、prdm16、pparγ与UCP1（P<0.01），显著上调PGC-1α，下调Leptin（P<0.05），冷刺激极显著上调 PGC-1α与 UCP1（P<0.01），显著上调 Cidea，下调 Leptin的mRNA的表达（P<0.05），结合作用极显著上调Cidea、prdm16、pparγ、PGC-1α、DiO2与UCP1，下调Leptin的mRNA的表达（P<0.01）。在eWAT中，AC极显著下调Leptin（P<0.01），显著上调prdm16、DiO2与pparγ（P<0.05）的mRNA的表达，冷刺激极显著下调Leptin（P<0.01），显著上调Cidea（P＜0.05），结合作用极显著上调 Cidea、prdm16、DiO2、pparγ与 UCP1，极显著下调 Leptin的mRNA的表达（P<0.01）；在BAT中，AC及冷刺激以及结合作用极显著上调Prdm16，AC显著上调PGC-1α（P<0.05），结合作用极显著上调PGC-1α和UCP1的mRNA的表达（P<0.01）。 3.通过WB技术检测UCP1、PGC-1α、FABP4和Leptin的蛋白表达情况， AC与冷刺激以及结合作用均会上调 UCP1和 PGC-1α的表达，抑制、FABP4和Leptin的蛋白表达强度。 4.通过免疫组织化学检测UCP1、PGC-1α、FABP4和Leptin的免疫显色强度，AC与冷刺激及结合作用使UCP1、PGC-1α、FABP4和Leptin抗体产生明显的阳性反应。 5.在AMPK/ACC1信号通路中发现，与空白组相比，用AC对小鼠进行处理时，p-AMPKα和p-ACC显著上升，具有极显著性（P<0.01），Compound C+AC差异显著（P<0.05）；与 AC组相比较，p-AMPKα的因子中 Compound C与Compound C+AC具有极显著差异（P<0.01）；结论：综上所述，冷刺激与AC及结合作用促进了白色脂肪棕色化，减少了白色脂肪的堆积；在 AMPK/ACC1信号通路中，黑枸杞花青素可激活AMPK/ACC1信号通路，其药效可被Compound C给阻断。

作者：

张文颖

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关键词：

黑枸杞花青素白色脂肪棕色化自适应产热信号通路实验药理

授予学位：

硕士

学科专业：

养殖

导师：

吴华、李长兴

学位年度：

2020

学位授予单位：

青海大学

语种：

中文

中图分类号：