摘要
甲基苯丙胺(METH)是一种高度成瘾的苯丙肢类精神剌激药物，在世界范围内被普遍滥用。长期滥用METH会导致神经元凋亡、线粒体功能障碍等问题。α-突触核蛋白(α-syn)是一种神经元蛋白，METH会引起α-syn过表达，从而造成多巴肢能神经元损伤。星形胶质细胞是中枢神经系统(CNS)中最大的神经胶质细胞群体，对于维持大脑稳态、保护神经元至关重要，METH作用后，脑内星形胶质细胞激活增生。研究发现α-syn在细胞间可以进行类阮蛋白式的传播，而星形胶质细胞是否在α-syn相关病理中起作用，以及具体的分子机制仍需进一步研究。 目的: 使用METH中毒体内外模型，检测星胶内α-syn表达量的变化，探究α-syn是否可以从神经元传递至星形胶质细胞;通过检测神经元细胞分泌的外泌体内α-syn表达量的变化，探究α-syn传递的方式:通过检测星胶内炎症因子及Nurrl表达量的变化，探究α-syn进入星形胶质细胞后星形胶质细胞产生的病理变化及分子机制。 方法: 第一章.建立小鼠METH慢性中毒小鼠模型、原代细胞模型以及SH-SY5Y细胞和U87MG细胞共培养模型，利用WB、?c、E等方法检测小鼠海马脑区、神经元和星形胶质细胞中α-syn的表达情况，研究α-syn能否从神经元传递至星形胶质细胞。 第二章.使用超速离心法分离细胞培养基中的外泌体，利用TEM、NTA和WB等方法对外泌体进行鉴定。将外泌体添加到星形胶质细胞培养基中，利用WB、E等方法检测星形胶质细胞中P-α-syn及炎症因子的变化。研究α-syn传递至星形胶质细胞的途径。将α-syn基因敲除小鼠神经元释放的外泌体和体外重组α-syn添加到星形胶质细胞培养基中，利用WB检测星形胶质细胞中炎症因子及Nurrl的表达变化，探究星形胶质细胞炎症反应的机制。 结果: 第一章.(1)METH处理后小鼠海马区α-syn及P-α-syn表达均升高，星形胶质细胞被激活，且星形胶质细胞与P-α-syn存在共定位现象;(2)星形胶质细胞本身α-syn表达量极低，且METH处理后α-syn表达量没有明显变化;(3)SH-SY5Y细胞和U87MG细胞共培养后发现，METH处理后U87MG细胞与P-α-syn蛋白存在共定位现象。 第二章.(1)从细胞培养基中提取到的外泌体纯度较高;(2)METH组细胞释放的外泌体数量更多，外泌体内P-α-syn含量增加;(3)METH组外泌体加入星形胶质细胞培养基后，星形胶质细胞内P-α-syn及炎症因子的表达升高(4)敲除α-syn基因星形胶质细胞内的炎症反应有所缓解;(5)重组α-syn加入星形胶质细胞培养基后，星形胶质细胞内炎症因子表达升高且Nurrl表达下降。 结论: METH可引起神经元内α-syn表达升高，升高的α-syn可以经外泌体从神经元传递到星形胶质细胞。摄取α-syn的星形胶质细胞会产生炎症反应，而Nurr1可能是星形胶质细胞产生炎症反应的关键分子。
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