摘要
弓形虫是一种专性寄生于细胞内的原虫，几乎能感染所有的温血动物，包括人类。尽管抗弓形虫疫苗种类繁多，但是疫苗效用评价都缺乏对动物免疫应答过程进行系统生物学监控。针对此问题，本研究首先构建及评价了多种疫苗免疫模型，接下来利用非标记定量蛋白质组学技术对小鼠免疫过程中的血清蛋白质组进行了检测及分析。 动物模型构建:首先利用CRISPR-Cas9技术成功构建了TGME49_276860基因敲除虫株，通过体外噬斑实验及体内攻虫实验发现该基因敲除株毒力并未明显降低。接下来，成功构建了TGME49_276860和TgSPATR双基因DNA核酸疫苗。动物攻虫实验表明TGME49_276860和TgSPATR双基因组的DNA疫苗能够显著延长小鼠存活时间，但是免疫小鼠并不能得到充分保护。最后利用紫外线照射成功制备了弓形虫阻强毒株减毒活苗。噬斑实验、流式细胞仪检测、电镜和动物实验表明弓形虫减毒活疫苗的最佳紫外照射时间为14min。攻虫实验表明免疫小鼠在感染100个野生型RH速殖子后存活率达到百分之百。 蛋白质组学分析及评价:根据紫外减毒疫苗动物模型，通过内眦采血法分别采集了对照组及免疫攻虫后28天组的小鼠血液，并利用TMT(tandem mass tags)蛋白质组学对血清样品进行了分析。结果表明不同组别呈现了明显不同的蛋白图谱。免疫小鼠在攻虫后28天明显拮抗了急性期时出现的蛋白紊乱。通过和正常对照组比较，发现免疫攻虫后28天组小鼠出现的差异表达蛋白显著富集于免疫及拮抗病原的相关的信号通路。 综上所述，本课题首次利用TMT蛋白质组学对紫外减毒疫苗免疫过程中的小鼠血清进行了分析，不仅成功绘制了免疫过程中血清蛋白图谱，还从蛋白质组学的角度解释了疫苗发挥效用的系统生物学机制。本研究为深入阐明弓形虫疫苗的作用机制奠定基础，也为新型疫苗的研发及体外干预治疗提供了数据参考。
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