摘要
阿奇霉素（AZM）是20世纪80年代末研发的第一个十五元环大环内酯类抗生素，具有抗菌谱广、半衰期长、在酸中稳定、副作用小等优点。AZM现已被广泛用于临床上各种细菌、支原体、衣原体感染的治疗。由于AZM对食源性动物的生长、抗菌、抗癌都起一定的作用，因此它也被广泛用于兽医临床。然而，动物源性食品中残留的AZM会对食品安全和人类健康产生危害，我国已于2005年将AZM列为畜禽禁用兽药。虽然国家明令禁止，但由于AZM抗菌效果好且使用方便、价格低廉，许多畜禽养殖户仍然会违规使用。因此，为了保证动物源性食品的安全，建立一种灵敏特异、方便准确的AZM的检测方法十分必要。 本实验采用活性酯法将AZM衍生后与载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联，合成免疫抗原AZM-BSA和检测抗原AZM-OVA。用AZM-BSA免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术筛选出一株能稳定分泌AZM抗体的杂交瘤细胞株，命名为50D10。用该细胞株注射BALB/c小鼠，收集腹水并用辛酸-硫酸铵法纯化。纯化后的腹水效价为1:4.0×105，重链亚型为IgG1，轻链为κ。AZM mAb与红霉素、罗红霉素、多拉菌素、克拉霉素、替米考星和泰乐菌素的交叉反应率均小于0.1%。随后运用方阵滴定法确定了抗原的包被浓度为0.1mg/L，抗体稀释倍数为1:4.0×105,初步建立了检测AZM的间接竞争ELISA方法。优化后的反应条件为Na2CO3-NaHCO3缓冲液作包被液，包被条件为4℃、16h，封闭时间为90min，二抗的稀释倍数为1:5000，竞争反应的温度和时间为37℃、60min。AZM浓度为0.5~8μg/L时，标准曲线的线性关系良好，线性回归方程为y=-0.6699x+0.5828（R2=0.9905），IC50为1.33μg/L，最低检测限LOD值为0.287μg/L。在牛奶中的添加回收率在79.6%～104.1%之间，变异系数在16.4%～27.3%之间。 综上所述，本实验制备出了灵敏度高、特异性强的AZM mAb，在此基础上建立了检测食品残留中AZM的间接竞争ELISA方法。以便进行现场大批量样品的快速筛查，为食品安全检测提供一个更高效的检测手段。
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