摘要
随着人们膳食结构的不断改变以及生活水平的不断提高，造成越来越多的人群出现肥胖，肥胖已成为一种全球性的“流行病”。肥胖往往伴随全身的低水平炎症反应，并诱导机体出现胰岛素抵抗。在2型糖尿病的发生、发展过程中胰岛素抵抗作为重要的发病因素与其有着密切的联系。胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍是2型糖尿病的两大病理生理特征。机体组织(脂肪、肝脏、肌肉等组织)产生胰岛素抵抗时，细胞摄取和利用葡萄糖能力下降，从而引发糖尿病。二氢杨梅素(Dihydromyricetin，DHM)是一种二氢黄酮醇类植物提取物，既往研究证实，二氢杨梅素通过调控AMPK、NRF2和NF-κB等信号通路发挥抗氧化、抗炎和增强胰岛素敏感性等多方面的作用，但DHM是如何增强胰岛素敏感性的分子机制尚不清楚。 本研究首先在活体水平上，以高脂饮食饲喂C57B/L6小鼠用于构建肥胖小鼠模型，灌服DHM12周观察其处理效果。通过测定小鼠的体重和体成分分析、组织切片染色、口服葡萄糖耐受试验以及血常规检测小鼠机体炎症水平，探究DHM改善肥胖个体炎症反应引起胰岛素抵抗的功效。在细胞水平上，通过炎症因子TNFα诱导成熟3T3-L1产生胰岛素抵抗，使用DHM、AMPK抑制剂、CaMKK2阻断剂、钙离子探针、葡萄糖摄取、qPCR和WB等分析手段，探究DHM抵抗炎症引起胰岛素抵抗的分子机制。得到的研究结果如下： 1.DHM减少高脂日粮诱导小鼠脂肪累积，降低肥胖诱导的胰岛素抵抗在活体水平上，ELISA检测结果表明DHM可显著降低血清及脂肪组织中的炎症因子(IL-1、IL-6和TNFα)水平，葡萄糖耐受试验结果表明DHM显著增强肥胖小鼠胰岛素敏感性。说明DHM能够有效的降低肥胖诱导的胰岛素抵抗。 2.DHM抑制TNFα诱导的3T3-L1细胞胰岛素抵抗 在细胞水平，通过50ng/mLTNFα处理3T3-L1构建细胞炎症模型，通过葡萄糖摄取、定量PCR和WB检测发现能够使3T3-L1细胞产生胰岛素抵抗。在使用DHM处理后，能够抑制TNFα诱导的3T3-L1细胞胰岛素抵抗。 3.DHM增强3T3-L1细胞胰岛素敏感性依赖AMPK 使用AMPK抑制剂和DHM共处理3T3-L1细胞之后，发现DHM抑制细胞胰岛素抵抗的能力也随之消失。说明DHM抑制3T3-L1细胞胰岛素抵抗依赖AMPK。 4.DHM增强3T3-L1细胞胰岛素敏感性依赖CaMKK2-AMPK 同样的，在使用了CaMKK2的抑制剂和DHM共处理3T3-L1细胞之后，发现DHM抑制细胞胰岛素抵抗的能力也随之消失。说明DHM抑制3T3-L1细胞胰岛素抵抗依赖CaMKK2-AMPK。 5.DHM通过IP3受体升高细胞内钙离子激活CaMKK2-AMPK 通过钙离子探针实验发现，在外源环境无钙离子存在的情况下，DHM能够升高细胞内钙离子浓度。随后使用磷脂酶C抑制剂和兰尼碱抑制剂之后，发现DHM是通过激活磷脂酶C的水解产生IP3后作用于内质网上IP3受体，从而释放钙离子，升高胞内钙离子浓度，激活CaMKK2-AMPK信号通路。 总之，本研究通过细胞和活体实验证明，DHM通过升高细胞内钙离子水平，激活CaMKK2-AMPK信号通路，改善机体肥胖炎症引起的胰岛素抵抗。肥胖引起的机体炎症反应是胰岛素抵抗和糖尿病发生的主要诱因，增加脂肪细胞的胰岛素敏感性和葡萄糖摄取是治疗2型糖尿病的手段之一。本研究的创新之处在于阐释了DHM缓解机体肥胖产生胰岛素抵抗的分子机制，为开发新型治疗胰岛素抵抗药物和解决2型糖尿病问题提供试验数据，具有重要的社会价值和科学意义。
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