摘要
为了解溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的致病机理，检测噬菌体对感染溶藻弧菌对虾的实际应用效果，利用溶藻弧菌(1×106CFU/mL)对凡纳滨对虾进行攻毒实验，在不同时间点(0、3、6、12、24、48h)分别取注射PBS缓冲液对照组(CK)、噬菌体产品(LUXON乐虾)浸泡注射溶藻弧菌后对虾的噬菌体组(BP)和仅注射溶藻弧菌的弧菌组(VA)中的对虾样本，分析了溶藻弧菌对凡纳滨对虾各组织结构形态、抗氧化性能、免疫相关基因表达和肠道菌群组成的影响。具体研究结果如下： (1)通过光学显微镜观察组织切片发现，与CK组相比3h时VA组和BP组鳃组织排列松散，组织结构受损变形。随着感染时间的延长，存在上皮细胞变形甚至破碎，鳃丝细胞中出现空泡的现象。VA组和BP组肝胰腺在3h出现了明显的上皮细胞脱落，管腔变形，细胞核大量分散在肝小管间隙。VA组和BP组肠道粘膜上皮细胞在6h出现明显的损伤，12h出现大面积脱落。证明了溶藻弧菌能在感染早期迅速破坏健康对虾的防御系统，其中肝胰腺和肠道在48h后，其组织形态出现恢复现象，说明对虾组织结构受到一定的损伤后具有恢复的能力。 (2)本研究检测了各组对虾血清中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和鳃、肝胰腺及血细胞中酚氧化酶原(Prophenoloxidase，proPO)基因和免疫缺陷因子(Immune deficiency， IMD)基因的表达量。结果表明，VA组MDA、ALT和AST活性在3h显著升高(P＜0.05)，机体遭受的氧化应激最为严重。而BP组ALT活性在3h显著低于VA组(P＜0.05)，随后在24h显著升高(P＜0.05)，另外AST活性的变化趋势与ALT相似。肝胰腺中VA组LvproPO表达量在3h显著上调(P＜0.05)，在3h~48h内，BP组LvproPO表达量显著低于VA组(P＜0.05)。在BP组鳃中LvproPO和LvIMD表达量在12h显著高于VA组(P＜0.05)，24h下降后在48h有出现明显回升(P＜0.05)。说明感染溶藻弧菌后对虾机体抗氧化能力增强协同先天性免疫系统体液免疫的激活，增强了对溶藻弧菌的抵抗力。而噬菌体的使用对对虾的抗氧化应激有一定帮助，但是效果并不持久，并且对于鳃组织的保护效果最明显。 (3)为了研究凡纳滨对虾感染溶藻弧菌后肠道微生物菌群的变化，将凡纳滨对虾分为空白组(NC)、PBS对照组(CK)和溶藻弧菌感染组(VA)三组，分别采集12h和48h的对虾肠道微生物样品，利用IlluminaMiSeq平台对细菌16SrDNA基因V3-V4区进行高通量测序分析。发现感染溶藻弧菌后虾肠道中变形菌门含量显著增加，放线菌门和软壁菌门的含量显著减少，表明变形菌门菌群的丰度变化可能在一定程度上反映了对虾肠道菌群失衡。感染12h后对虾肠道菌群中希瓦氏菌属(Shewanella)丰度显著上升(P＜0.05)，而在感染48h后Candidatus_Bacilloplasma丰度显著降低(P＜0.05)。健康对虾肠道内微生物群落维持着动态平衡的状态，在感染溶藻弧菌后，对虾肠道细菌群落多样性在12h明显降低，这可能是由于Candidatus_Bacilloplasma和Shewanella的增殖所致，具体的作用机制还需进一步研究。研究结果表明，肠道内细菌群落动态平衡的稳定有助于对虾抵抗病原菌的定植。
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