摘要
目的：研究多聚谷氨酰胺疾病蛋白Ataxin-3对parkin介导的线粒体自噬的影响。 方法：扩增并提取包含目的基因的质粒(Ataxin-3-20Q-EGFP，Ataxin-3-80Q-EGFP，Ataxin-3-130Q-EGFP,Flag-parkin,Flag-parkin K16IN,Flag-parkin T240R,Flag-parkin C418R，Flag-parkin C43IF，Flag-parkin P437L)-20℃下保存备用;用相应质粒对人胚胎肾上皮细胞（HEK293细胞）进行转染;用Antimycin A和Oligomycin处理细胞制造线粒体损伤模型，运用免疫荧光法检测Ataxin-3与parkin及其突变体在线粒体上的定位和聚集情况以及线粒体清除的情况。 结果：实验中发现，在转染的HEK293细胞线粒体损伤后，Ataxin-3-20Q-EGFP，Ataxin-3-80Q-EGFP和Ataxin-3-130Q-EGFP表达的包含不同长度谷氨酰胺重复的Ataxin-3在短时间内就可以在细胞中呈点状富集在损伤的线粒体上，并且和parkin共定位。Ataxin-3在长时间线粒体损伤后的线粒体清除中起到重要的作用。 另外还发现了parkin不同病理突变体在线粒体自噬过程中的影响，其中RING0区突变体K161N在部分程度上减缓了到线粒体的转运，RING1区突变体T240R可以转运到线粒体上但不能招募Ataxin-3，RING2区突变体C418R，C431F和P437L完全不能定位在线粒体上。 结论：去泛素化酶Ataxin-3蛋白可以和parkin共同作用参与线粒体自噬。parkin不同位点的病理突变导致了其调控线粒体自噬功能的损伤。
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