摘要
本文主要从以下几部分进行论述： 第一部分 肾衰大鼠的心肌纤维化及心肌凋亡 目的: 构建肾衰大鼠模型，观察肾衰大鼠的心肌纤维化和心肌凋亡 方法: 1.我们构建了5/6肾切除的肾衰大鼠模型，分为手术组和空白对照组 2.测定肾衰大鼠血清肾功能，尿素氮，尿毒素，硫酸吲哚酚(indophenol sulfate，IS)水平 3.取心脏组织制备石蜡切片，Masson观察心肌纤维化情况，Tunel染色观察心肌凋亡情况。 结果: 1.相比于对照组，。肾衰组大鼠血清肾功能，尿素氮及IS浓度均显著提高。 2.Masson染色提示，肾衰组大鼠心肌呈弥漫性纤维化纤维化改变。 3.Tunel结果提示肾衰组大鼠心肌凋亡率(11.2±1.1％)相比于对照组(3.6±0.83％)差异显著(P＜0.01). 结论: 1.肾衰组大鼠肾功能相关指标均提升显著，提示肾衰模型建造成功。 2.肾衰大鼠导致心肌纤维化及心肌凋亡发生，IS可能参与其中。 第二部分 IS诱导心肌细胞凋亡的发生 目的: 使用IS刺激H9C2心肌细胞，观察不同时间，不同浓度作用后心肌细胞凋亡情况。 方法: 1.用不同浓度的IS(50，100，250，500，1000μ mol/1)刺激H9C2心肌细胞3h提取心肌细胞蛋白，免疫印迹法观察凋亡相关蛋白(Bax，Bcl-2，Caspase-3)的表达。 2.用500μ mol/l的IS干预H9C2心肌细胞不同的时间(15min，30min，1，3，6，12h)后观察凋亡蛋白表达水平。 结果: 1.在浓度梯度中，Bax，Caspase-3表达逐渐增多，Bcl-2表达逐渐减少，组间差异显著(P＜0.05)。 2.在时间梯度中，Bax，Caspase-3表达逐渐增多，Bcl-2表达逐渐减少，组间差异显著(P＜0.05)。 结论: IS可以诱导心肌细胞凋亡，随着浓度的增加或者刺激时间增加，凋亡表达越多。 第三部分 激活PI3K/Akt信号通路后IS诱导心肌细胞凋亡减少 目的: 观察PI3K/Akt磷酸化水平表达，初步探讨IS通过PI3K/Akt介导心肌凋亡的机制 方法: 1.不同时间，不同浓度的IS干预H9C2后，蛋白印迹观察PI3K/Akt磷酸化水平。 2.使用PI3K激活剂后，蛋A印迹测定H9C2心肌细胞中凋亡蛋白的表达以及磷酸化水平表达。 结论: 1.IS一定程度上可以抑制PI3K/Akt通路的表达，促进心肌细胞凋亡。 2.激活PI3K/Akt通路后，心肌凋亡减少(P＜0.05)，提示活化PI3K/Akt通路可能有助于抑制心肌凋亡。
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