摘要
植物脂肪酶分为GDSL(Gly-Asp-Ser-Leu)脂肪酶和GXSXG(Gly-x-Ser-x-Gly)脂肪酶，GDSL脂肪酶是脂类水解酶(脂肪分解酶)家族，脂肪酶可以催化三酰甘油酯及其他一些水不溶性酯类的水解、醇解、酯化、转酯化及酯类的逆向合成反应。在食品、造纸、化妆品、制药、洗涤剂、生物材料等多个方面都有着很广泛的应用。脂肪酶广泛存在于细菌和植物中，但在植物中研究的还比较少。植物种子生物反应器具有高水平表达外源基因、基因污染概率很低、植物种子可大规模生产并易于储存、表达产物易于纯成本较低等优点。本研究首先根据种子特异性的特点设计了种子特异性启动子SSP2，利用GUS组织化学染色的方法鉴定其具有荚皮特异性。另外，利用种子生物反应器系统，通过天然种子特异性启动子(菜豆启动子PvP)驱动大豆脂肪酶基因GmLipase转化亚麻芥，为后续脂肪酶的生产提供转基因材料。 研究结论如下： 1.根据种子特异性启动子的特点人工合成种子特异性启动子SSP2，构建表达载体pCAMBIA3301-1-SSP2，并成功转入农杆菌(EHA105)。利用Floral-Dip法转化野生型拟南芥，获得5株T1代转SSP2基因拟南芥。利用GUS组织化学法对T2代转基因株系进行鉴定，结果显示SSP2转基因拟南芥根，茎，叶，花，种子未被染色，种子荚皮被染色，证明人工合成启动子SSP2具有荚皮特异性。 2.成功从大豆Williams82中克隆得到脂肪酶基因GmLipase(1032 bp)，并从现有含菜豆启动子PvP质粒中亚克隆PvP，构建植物表达载体pCAMBIA3301-PvP-GmLipase，并将该质粒成功转入农杆菌(EHA105)，通过Floral-Dip法侵染转化野生型亚麻芥，经过筛选获得9株T1代转GmLipase基因的亚麻芥。
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