摘要
随着对优质牧草需求量的日益增加，我国各省区苜蓿的种植规模不断扩大，病害防控等问题也愈加复杂。苜蓿叶部病害种类繁多，常常严重影响苜蓿品质和产量，且大多复合侵染，防控难度加大。本课题组对新疆苜蓿病害进行田间调查时，发现呼图壁县苜蓿田中的两种特异性症状不同的叶斑病。将采集的苜蓿叶部病斑进行分离纯化后，经致病性测定，确定病原菌。根据病菌形态特征将其初步鉴定为由苜蓿茎点霉(Phoma medicaginis)和囊状匍柄霉(Stemphylium vesicarium)引起的2种叶斑病。这2种病害在新疆仅有发生报道，但对病原菌的分类地位、生物学特性，病害发病规律、流行条件及其防治等均缺少明确记载。本课题对采集的2种病害样本进行病原菌分离纯化，运用形态学结合分子生物学特征鉴定病原菌种类，运用十字交叉法测定不同温度、碳源、氮源、光照及不同培养基对2种病原菌生长的影响，采用菌丝生长抑制法测定了11种供试药剂对2种病原菌的抑菌效果。研究成果如下： 1.提取苜蓿茎点霉叶斑病病原菌DNA，以此为模板，分别对病原菌的rDNA-ITS和肌动蛋白(β-actin)基因进行扩增、测序、比对，利用多基因片段构建系统发育树，最终结果显示：2种基因的系统进化分析均与已报道的苜蓿茎点霉聚在同一分支，亲缘关系最近，同源性为98%和100%，最终将该病病原菌确定为苜蓿茎点霉。生物学特性研究表明，在供试的11种不同培养基、8种碳源和12种氮源培养基上苜蓿茎点霉菌株PM-1的菌丝均可正常生长，其中最适培养基是GPA和PSA，最佳碳源是麦芽糖，最佳氮源是L-谷氨酰胺，菌落直径在不同培养基、碳源、氮源之间均存在显著差异；在5℃-30℃温度范围内该菌菌丝均可生长，最适生长温度25℃，致死温度55℃；24h持续光照有利于菌丝生长。 2.提取苜蓿匍柄霉叶斑病病原菌DNA，以此为模板，分别对病原菌的rDNA-ITS、β-微管蛋白(β-tubulin)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)、延伸因子α(EF1-α)基因进行扩增、测序、比对，利用多基因片段构建系统发育树，最终结果显示：4个基因的系统进化分析均与已报道的囊状匍柄霉聚在同一分支，亲缘关系最近，最终将该病原菌确定为囊状匍柄霉。生物学特性研究表明，在供试的11种不同培养基、8种碳源和12种氮源培养基上苜蓿匍柄霉菌株SV-1的菌丝均可正常生长，其中最适培养基是GPA，最佳碳源是菊糖，最佳氮源是L-谷氨酰胺，菌落直径在不同培养基、碳源、氮源之间均存在显著差异；在5℃-35℃温度范围内该菌菌丝均可生长，最适生长温度25℃，致死温度60℃；不同光照处理对菌丝生长差异不显著。 3.采用菌丝生长抑制法测定了11种供试药剂对2种病原菌的抑菌效果，结果显示：针对苜蓿茎点霉菌株PM-1，80%代森锰锌浓度为781.25mg?L-1时抑制率可达到85.53%；32.5%苯甲?嘧菌酯和43%戊唑醇对苜蓿茎点霉有较高的毒力，EC50值分别为14.146mg?L-1和14.858mg?L-1；烯酰?代森联毒力最差，EC50值为99.098mg?L-1。针对囊状匍柄霉菌株SV-1，32.5%苯甲?嘧菌酯、50%异菌脲浓度为203.13mg?L-1、39.06mg?L-1抑菌率均达到83.61%；50%异菌脲、40%嘧霉胺、30%肟菌?戊唑醇，对囊状匍柄霉均有较高的毒力，EC50值分别为3.645mg?L-1、4.761mg?L-1和7.799mg?L-1；68%精甲霜?锰锌敏毒力最差，EC50值为1951.088mg?L-1。
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