摘要
石榴花(Punica granatum L.flowers)是民族医药常用药材。近年来，文献报道石榴花具有抗氧化、抗糖尿病和保肝等多种药理作用。本文采用体内、外结合的中药药效物质研究策略，首先对石榴花提取物进行系统的化学成分定性分析鉴定，再对大鼠口服石榴花提取物后生物样品（血，肝脏，脾脏，心脏，肾脏，肺脏，尿液和粪便）中的原型化合物和代谢物进行分析;在此基础上，对石榴花提取物及大鼠口服后吸收进入体内（肝脏、血）的六个主要成分（鞣花酸，柯里拉京，短叶苏木酚酸，没食子酸，芹菜素，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷）进行定量分析研究，对体内暴露量较高的成分进行抗肝纤维化药理筛选，发现了具有抑制肝星状细胞中α-SMA和Fibronectin的生成等作用的活性成分。此外，对石榴花提取物中及大鼠口服后在血和肝脏中都具有高暴露量的单体柯里拉京进行体内外代谢研究。取得以下主要研究结果: 1.石榴花提取物及大鼠口服后体内成分的定性分析研究 采用HPLC-Q-TOF-MS2技术从石榴花70％乙醇提取物中鉴定出67个化合物，其中包括18个鞣花鞣质类成分、15个没食子酸及没食子酰基衍生物类成分、9个花青素类成分、14个黄酮类成分，其中7个化合物首次鉴定。首次对大鼠口服石榴花70％乙醇提取物后进入体内的原型成分及其代谢产物进行分析研究，在生物样品（尿液、粪便、血、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和肺）中鉴定出24个原型化合物及36个代谢产物。其中，尿液含20个原型化合物和31个代谢物，粪便含22个原型化合物和26个代谢物，血浆中有16个原型化合物和18个代谢物。组织器官中仅检测到其中的一部分原型化合物和代谢物，肝脏含14个原型化合物和17个代谢物，脾脏有7个原型化合物和4个代谢物，肾脏有6个原型化合物和6个代谢物，心脏有5个原型化合物和4个代谢物，肺脏检测到2个原型化合物和4个代谢物。这些结果表明，并非所有石榴花提取物富含的化合物都能被吸收。 2.石榴花提取物主要成分在肝脏和血浆中的定量分析和抗肝纤维化活性筛选 在体内代谢分析基础上，对石榴花70％乙醇提取物中的成分及大鼠口服后体内成分进行定量分析及药代动力学研究，并且对这些化合物进行体外抗肝纤维化细胞活性筛选。结果表明:在石榴花提取物中六种成分的含量大小顺序为:鞣花酸（以1计）＞柯里拉京(0.57)＞短叶苏木酚酸(0.19)＞没食子酸(0.096)＞芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(0.015)＞芹菜素(0.002)。大鼠口服石榴花提取物后这六种化合物在肝脏中均具有一定的暴露量，其暴露量(AUC)顺序为:柯里拉京（以1计）＞鞣花酸(0.28)＞短叶苏木酚酸(0.21)＞没食子酸(0.14)＞芹菜素(0.12)＞芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(0.09)。在血中检测到的四个化合物的暴露量顺序为柯里拉京(1)＞鞣花酸(0.24)＞短叶苏木酚酸(0.18)＞没食子酸(0.12)。在体外抗肝纤维化细胞活性筛选中，发现短叶苏木酚酸、没食子酸和芹菜素可抑制肝细胞脂滴生成，表明这三个化合物可改善脂质代谢紊乱。柯里拉京，没食子酸和芹菜素可抑制肝星状细胞中α-SMA和Fibronectin的生成，表明这三个化合物可通过抑制肝星状细胞活化发挥抗肝纤维化作用。综合分析上述成分在靶组织肝脏及血中的暴露量和体外细胞活性筛选结果，推测柯里拉京、短叶苏木酚酸、没食子酸和芹菜素可能是石榴花中抗肝纤维化的主要药效物质。 3.柯里拉京的体内外代谢分析研究 柯里拉京(Corilagin)是一种鞣花鞣质类(Ellagitannins)化合物。鉴于柯里拉京是大鼠口服石榴花提取物后在靶组织肝脏和血中暴露量最高的化合物，且体外具有抗肝纤维化活性，本文首次对柯里拉京的体内外代谢进行系统研究，包括在大鼠体内和培养的肠道细菌培养和肝微粒体中的代谢。采用HPLC-Q-TOF-MS2技术，首次对大鼠口服柯里拉京后的生物样品（尿液、粪便、血浆和组织器官）进行代谢分析研究，鉴定出柯里拉京及其24种代谢产物，包括14种柯里拉京的Ⅱ相代谢产物、3种水解代谢产物（鞣花酸、没食子酸、M3）以及水解代谢产物的7种代谢产物。在体外，从培养的大鼠肠道细菌体系和肝微粒体体系中均鉴定出柯里拉京上述的三种水解代谢产物。这些研究结果表明，柯里拉京不仅能在大鼠体内进行广泛的Ⅱ相代谢反应，且能在大鼠体内以及在培养的大鼠肠道细菌体系和肝微粒体体系中进行水解反应。柯里拉京在大鼠体内的代谢途径为水解，甲基化，糖基化，还原，葡萄糖醛酸化和硫酸化等。本文首次报道上述纯化的鞣花鞣质类(Ellagitannins)化合物的Ⅱ相代谢物（除了单甲基化代谢物）及其在体内分布的研究结果。
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