摘要
肾纤维化是多种慢性肾病发展的终末阶段，肾脏上皮细胞的上皮间充质转化(EMT)是诱使肾纤维化的主要诱因之一，所以抑制EMT可有效地减缓肾脏的纤维化进程。褐藻多糖硫酸酯是一种褐藻中提取出的硫酸化多糖，已经被证明对多种肾脏疾病具有治疗作用。褐藻多糖硫酸酯的分子量对其生物活性有很大影响，本实验探究不同分子量褐藻多糖硫酸酯的制备及其在TGF-β1诱导的小鼠肾小管上皮细胞(MTEC)模型中的抗EMT活性。 (1)使用氧化降解法降解褐藻多糖硫酸酯(FPS)制备了不同分子量的褐藻多糖硫酸酯，通过探究反应时间、反应温度和氧化剂浓度对降解产物分子量的影响，得到了合适的降解工艺参数;根据降解产物的分子量，选取了合适的制备工艺，并制备了三批降解产物。通过对三批产物进行化学分析，验证了该工艺的稳定性，并选取其中一批化学成分相似但相对分子量分布在3.3KDa到49.3KDa的褐藻多糖硫酸酯样品(LHX1-9)进行了单糖含量测定与红外光谱分析，结果表明，LHX1-9与FPS间各单糖比例基本相同，且红外吸收峰的峰型与位置也基本相同，表明本降解工艺可以保持褐藻多糖硫酸酯的糖链结构不变。 (2)采用6ng/ml的TGF-β1对MTEC细胞进行建模，细胞出现典型的间充质细胞特征。细胞形态使用倒置显微镜进行观察和记录，细胞活力测定使用CCK-8试剂盒，EMT标志蛋白的表达使用蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光法进行检测。结果表明，LHX1(Mw=3.3KDa)和LHX3-9(Mw=6.6KDa，8.3KDa，11.3KDa，14.9KDa，25.2KDa，35.4KDa，49.3KDa)可以减少MTEC细胞中纤维连接蛋白(Fn)或结缔组织生长因子(CTGF)的表达，维持MTEC细胞正常的上皮细胞形态，抑制TGF-β1诱导的EMT转化。褐藻多糖硫酸酯的相对分子量和其抗EMT活性之间的关系是非线性的。LHX1(Mw=3.3KDa)，LHX5(Mw=11.3KDa)和LHX8(Mw=35.4KDa)可以同时下调Fn蛋白和CTGF蛋白的表达，表现出更优的抗EMT活性。
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