摘要
目的观察柠檬醛在鸡胚发育过程中引起腭发育相关组织缺损的形态学变化，检测与腭发育相关的鼻突组织细胞中维甲酸受体β(RARβ)和转化生长因子β3(TGFβ3)的表达。探索维甲酸与TGFβ3信号分子对腭发育及腭缺损的影响。 方法(1)将20期鸡胚按随机原则分为7组，实验组按CT浓度分为6组，0.001g/ml、0.01g/ml、0.05g/ml、0.1g/ml、0.5g/ml、0.88g/ml，对照组为二甲基亚砜(DMSO)组，另设空白对照组。 (2)每组20例鸡胚孵化至38期取大体标本，进行阿辛蓝/茜素红骨骼染色后对标本进行形态学分析和评价，找出适宜浓度为后续实验浓度。 (3)0.5CT实验组和DMSO对照组分别孵化至24期、25期、26期、27期时取出标本，各实验组每期取20例标本，标本固定于4％的多聚甲醛中4-24h，脱水、常规包埋后，制作3μm的石蜡切片，用于HE染色和免疫组织化学法检测。HE切片用于观察CT对鸡胚发育中与腭突发育相关的鼻突组织的形态学变化。采用免疫组织化学法检测比较CT实验组和DMSO对照组鸡胚鼻突组织中的各期RARβ和TGFβ3表达的变化 结果(1)20期鸡胚CT微珠植入上颌突时，引起鼻骨，上颌骨，颧骨，方轭骨完全缺失，但上喙及腭仍是完整的。CT微珠植入鸡胚20期右侧鼻窝时，结果对右喙部及右腭有影响，对上颌骨较小。因此，确定鸡胚20期的鼻窝是本实验植入微珠的最佳时期和部位。 (2)大体标本骨骼染色后的形态学分析DMSO对照组的鸡胚发育正常，其大体标本与正常鸡胚的大体标本外形无明显异常。0.001g/ml、0.01g/ml、0.05g/ml的CT实验组，对鸡胚颌面骨骼发育影响作用甚小，大体标本与正常鸡胚的大体标本无明显异常。从0.1g/ml的CT组开始出现两例鸡胚鼻甲缺损;当浓度为0.5g/ml和0.88g/ml的柠檬醛实验组，对鸡胚有稳定的影响作用，导致鸡胚颌面骨骼发育缺损。0.5g/ml组缺损程度较0.88g/ml组轻。因此我们选定0.5g/ml的CT浓度为后续实验研究浓度。 (3)光镜下观察:矢状面切片上24期DMSO对照组，可见双侧鼻窝逐渐加深且深度对称;24期CT组实验组，CT作用下由于处理侧(右侧)鼻突发育缓慢，右侧鼻窝比左侧鼻窝浅。额切面切片，24期DMSO对照组鸡胚的HE切片可见双侧外侧鼻突发育对称，大小差别不明显。24期CT实验组髓切片可见双侧外侧鼻突发育不对称，处理侧外侧鼻突几乎未生长发育，而对侧外侧鼻突外向生长明显。矢状面切片26期鸡胚右侧壁左侧发育迟缓，26期额状面切片可见处理侧的外侧鼻突的生长发育较右侧慢，右鼻窝的宽度较左侧宽。 (4)免疫组织化学法检测发现，在实验组和对照组中，实验组各期内Rarβ的表达呈轻微持续性下降趋势，差异无统计学意义(P＞0.05)。鸡胚同一期内实验组和对照组比较有差异(P＜0.05)，Rarβ表达在CT微珠植入后被下调，可能早期即被下调且下调过程迅速，后期为轻微持续性下降过程。柠檬醛作用于鸡胚面突后导致TGFβ3在鸡胚鼻突中表达下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论(1)0.5g/ml的CT微珠植入鸡胚20期鼻窝外胚层，影响与鸡胚腭发育相关的鼻突组织。 (2)CT通过抑制鼻窝处的视黄醛脱氢酶，使RARβ与TGFβ3表达下调，鸡胚鼻突发育障碍影响腭突形成，诱导单侧腭部组织缺损。 (3)通过蛋壳开窗，在胚胎发育的早期就可以直接接触胚胎的颅面部，微珠载体将作用因素局限于鸡胚颌面部，减少母体的干扰因素。因此使用鸡胚作为研究唇腭裂的动物模型，是对哺乳动物唇腭裂研究的一个非常好的补充。
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