摘要
目的:探究芦丁对叔丁基过氧化氢(TBHP)所致的HepG2细胞氧化损伤的保护作用及其机制。 方法:采用TBHP诱导HepG2细胞氧化损伤建立损伤模型，将细胞随机分为对照组、TBHP损伤组、芦丁低、中、高剂量组。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测芦丁对HepG2细胞增殖的影响，比色法检测细胞外液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性，比色法检测细胞内丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;通过DCFH-DA荧光染色法观察细胞内活性氧(ROS)的水平，采用原位末端转移酶标记(TUNEL)技术观察TBHP所致HepG2细胞凋亡。Westernblot法检测细胞内PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、IKKβ、p53和PARP的蛋白表达情况。 结果:经不同浓度的芦丁预处理HepG2细胞24h后，与TBHP损伤组比较，芦丁能显著提高人肝癌HepG2细胞存活率(P＜0.05);并且显著降低细胞外液中ALT、AST和LDH活性(P＜0.05);降低细胞内MDA含量(P＜0.05)，升高细胞内SOD活性和GSH含量(P＜0.05)。DCFH-DA染色结果表明，与对照组比较，TBHP损伤组细胞产生强绿色荧光，显示细胞内产生过量的ROS(P＜0.01);与TBHP损伤组相比较，芦丁低、中、高剂量组细胞分别产生不同程度的微弱绿色荧光，ROS的水平有所降低(P＜0.05)。TUNEL染色结果显示，与对照组比较，TBHP损伤组细胞荧光强度明显增高，细胞发生凋亡严重(P＜0.01);与TBHP损伤组相比，芦丁低、中、高剂量组细胞荧光强度逐渐减弱，细胞凋亡减少(P＜0.05)。Westernblot结果显示，与对照组比较，TBHP损伤组HepG2细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达水平下降(P＜0.05)，而NF-κB、p-NF-κB、IKKβ的蛋白表达水平显著上升(P＜0.05);与TBHP损伤组相比，芦丁组HepG2细胞内PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达水平显著升高(P＜0.05)，芦丁高剂量组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的蛋白表达水平最高(P＜0.05)，而细胞内NF-κB、p-NF-κB、IKKβ的蛋白表达水平下降(P＜0.05)，芦丁高剂量组NF-κB、p-NF-κB、IKKβ的蛋白表达水平最低(P＜0.05)。与对照组相比，TBHP损伤组细胞内p53蛋白表达水平明显升高，而PARP的蛋白表达水平明显下降(P＜0.05);而与TBHP损伤组比较，芦丁组细胞p53的蛋白表达水平有所下降，PARP的蛋白表达水平有所上升(P＜0.05)。 结论:芦丁能够保护叔丁基过氧化氢引起的肝细胞氧化损伤，其保护作用可能与PI3K/Akt和NF-κB信号通路有关。
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