摘要
目的： 观察甜茶护齿含片对口腔微生态环境中4种常住微生物体外生长的影响，探讨甜茶作为一种甜味替代品的同时是否引起口腔常住微生物的生态失调，为进一步开发利用甜茶护齿含片提供科学依据。 方法： 1、细菌的分离和鉴定:收集15份口腔临床检查健康者唾液标本，标本采集震荡10～20s，稀释后取10ul用无菌玻棒分别涂布在胰酶水解物大豆琼脂(TSA)平板上和沙堡氏琼脂培养基平板上。置37℃的恒温培养箱培养48h，将不同形态菌落挑取划线接种分离培养，得到不同的纯培养菌株。根据菌落的形态及革兰染色，做出初步判断，并送医科大学第一附属医院临床医学检验中心细菌室自动生化反应仪鉴定细菌种属。 2、菌液的制备:将鉴定后的细菌传代培养24h，收集细菌并以3500r/min离心15min，收集细菌，无菌生理盐水洗菌2次，调540nm波长处OD值为1.0的菌悬液。 3、甜茶护齿含片混悬液的配制及实验分组 实验组:将甜茶护齿含片在无菌条件下研磨成粉末，秤取粉末50.00g，加蒸馏水至100ml，再将甜茶护齿含片混悬液采用二倍稀释法，用蒸馏水配制成500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.3mg/ml5个浓度组的溶液，115℃灭菌30分钟，备用。阴性对照组:不含甜茶护齿含片粉末的无菌蒸馏水。空白对照组:不含甜茶护齿含片粉末的空白培养基不接种细菌。 4、琼脂稀释法对其抑菌效果进行测定:将已倍比稀释的5种不同浓度的甜茶护齿含片混悬液分别加入培养基中加热，充分混匀倒入灭菌平皿，将不同的菌株溶液点种在含不同浓度甜茶甙的琼脂平板上。接种好后置37℃培养箱中24h，观察结果，以肉眼观察平板上细菌无生长含甜茶甙的琼脂平板浓度即MIC。设立不含甜茶甙的平板做阴性对照。 5、定性测定的纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法测定不同浓度的甜茶护齿含片溶解物的抑菌圈直径:选取MIC以上5个浓度的甜茶护齿含片溶液，用无菌滤纸片与样品液在51℃水浴35min，配制成药敏片备用。将药敏片贴在已均匀涂板接种测试菌株的琼脂平板上，37℃培养24小时测量其抑菌圈直径。 结果： 1、甜茶护齿含片对各种微生物的最低抑菌浓度分别为金黄色葡萄球菌125mg/ml，黏性口腔球菌为250mg/ml，唾液链球菌和白色念珠菌均为500mg/ml。 2、甜茶护齿含片定性测定的纸片扩散法(disk diffusion test)，甜茶护齿含片各浓度组对比阴性对照组，4种微生物的生长均有一定的抑制作用(P＜0.05)，随着甜茶护齿含片纸片浓度的逐渐下降，金黄色葡萄球菌在各浓度组间的差异有统计学意义(P＜0.05)，其它3种微生物浓度组间差异无统计学意义(P＞0.05)。4种微生物组中，金黄色葡萄球菌对甜茶护齿含片比较敏感，其它3组微生物对甜茶护齿含片均不敏感。 结论： 甜茶护齿含片对口腔中的金黄色葡萄球菌的生长具有抑制作用，对黏性口腔球菌，唾液链球菌和白色念珠菌的生长抑制作用不明显。表明在一定程度上对口腔微生态不造成危害，在龋病防治领域，作为从天然植物甜茶中提取开发研制的甜茶护齿含片，可作为一种健齿护齿功效的口腔保健品开发利用，将会具有良好的应用和开发前景。
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