摘要
背景肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC，以下简称肝癌)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，预后极差。单核昔酸多态性(singlenucleotide polymorphism,SNP)在各种癌症的研究中作为反映疾病进展和潜在的预后指标已引起广泛关注。DNA基因SNPs是影响不同个体间修复能力差异的主要因素，DNA损伤修复机制与多种肿瘤的发生、发展及预后有关:在调节免疫反应和细胞生长的过程中，细胞因子基因的改变可能影响基因表达并使机体表现出不同的反应而引起某些个体预后不良，但两者SNPs在肝癌预后中的具体作用并不清楚。 本研究分为两部分探讨基因多态性与肝细胞癌的关联，第一部分分析DNA碱基切除修复途径(base excision repair,BER)基因XRCC1、APE1、HOGG1，核音酸切除修复途径(nucleotide excision repair,NER)基因XPC、XPD、XPG和DNA链断裂修复途径(DNA strand-break repair,DSBR)基因XRCC3的10个基因位点单核昔酸多态性与肝细胞癌临床特征的关系，并探讨其与肝细胞癌整体生存时间(Overall survival,OS)、无进展生存时间(Progression-free survival,PFS)的关系:第二部分探讨细胞因子Th1细胞(Th1 cell)通路基因IL-2、IL-12B、TNF-β、IFN-γ,Th2细胞(Th2 cell)通路基因IL-6、IL-10和重要细胞因子IL-1B、TNF-α的14个基因位点单核音酸多态性与肝细胞癌临床特征、术后无复发生存时间(Relapse free survival,RFS)及整体生存时间的关联，为肝细胞癌的防治和预后评价提供参考依据。 第一部分DNA修复途径相关基因多态性与肝细胞癌临床特征及预后的关联研究 目的探讨广西地区人群DNA碱基切除修复途径基因XRCC1-194、XRCC1-280、XRCC1-399、APE1-148、HOGG1-326，核昔酸切除修复途径基因XPC499、XPC939、XPD312、XPG1104和DNA链断裂修复途径基因XRCC3-241共7个基因10个位点单核昔酸多态性与肝细胞癌临床特征、整体生存及无进展生存的关联，为肝细胞癌的防治和预后评价提供参考依据。 方法收集2007年2月至2008年9月在广西医科大学第一附属医院首次确诊和治疗(接受根治性切除术或非手术治疗)的肝细胞癌新发病例184例。通过查阅住院病历详细记录患者的一般情况、确诊时间、治疗方式、影像学检查结果等临床数据并进行电话随访，观察患者存活、复发、转移及死亡情况。采用TaqMan-MGB荧光定量PCR技术对上述位点进行分型检测，应用EpiData3.0进行资料双录入和一致性检验，运用SPSS13.0对数据进行统计学分析。以x2检验或确切概率法比较各基因型分布频率与肝癌临床特征的关系，用乘积极限法(Kaplan-Meier-method)绘制生存曲线并进行单因素生存分析，对数秩检验(Log-rank test)比较上述位点不同基因型携带者总生存时间、无进展生存时间的差异，Cox比例风险回归模型进行DNA修复基因多态性与肝癌预后关联的多因素分析。 结果(1)x2检验结果显示，XRCC1-194基因多态性与肿瘤个数，XRCC1-280基因多态性与肿瘤位置，XPC939基因多态性与有无包膜，XPD312基因多态性与肿瘤直径大小均有统计学意义(P＜0.05)。 (2)K-M法单因素分析结果显示，APE1-148SNP、XRCC3-241SNP基因型与HCC患者的总生存时间有统计学意义(P＜0.05)。APE1-148GG、GA、AA基因型与HCC患者的无进展生存时间有统计学意义(P＜0.05)。 (3)分层分析结果显示，APE1-148A等位基因(GA+AA)对患者整体生存的危险效应在女性患者、非手术治疗患者、接受化疗或放疗患者、肿瘤位置在肝右叶患者、无子灶患者、有包膜患者中更为显著。其危险性对于患者无进展生存的影响亦基本一致。XRCC3-241杂合子CT基因型对患者生存的危险效应在男性患者、接受根治术患者、接受化疗或放疗患者、有包膜患者中表现更为显著。 (4)多因素Cox回归分析显示，携带APE1-148AA基因型是肝癌患者预后生存的重要影响因素，携带AA基因型可增加肝癌患者的死亡风险(校正HR=2.045，95％CI:1.307～3.200)。APE1-148AA基因型是肝癌无进展生存时间的影响因素，携带AA基因型可缩短肝癌患者的无进展生存时间(校正HR=2.049，95％CI:1.396～3.006)。 (5)BER、NER..DSBR三条修复途径联合基因型频率分布与大体分型有关(P＜0.05)，未发现联合基因型频率与HCC患者OS、PFS有关，分层分析亦未发现有统计学差异(P＞0.05)。 结论DNA修复基因多态性与肝癌临床特征存在一定关联，携带APE1-148AA基因型可能缩短患者的无进展生存时间，增加死亡风险。 第二部分细胞因子相关基因多态性与肝细胞癌临床特征及预后的关联研究 目的探讨广西地区人群细胞因子Th1通路基因IL-2-330、IL-12B-1188、TGF-β1-509、IFN-γ-1615、IFN-γ-5171，Th2通路基因IL-6-572、IL-10-819、IL-10-592和重要细胞因子IL-1B-31、IL-1B-511、IL-1B-1464、TNF-α-308、TNF-α-863、TNF-α-1031共8个基因14个位点单核昔酸多态性与肝细胞癌临床特征、术后复发及整体生存的关联，为肝细胞癌的防治和临床结果预测提供参考依据。 方法收集2007年2月至2009年9月在广西医科大学第一附属医院和广西医科大学附属肿瘤医院就诊和治疗(接受根治性切除术或非手术治疗)的肝细胞癌新发病例357例。临床资料收集、电话随访内容、实验技术方法、数据录入和统计分析软件与第一部分一致。以x2检验或确切概率法比较各基因型分布频率与肝癌临床特征的关系，用乘积极限法(Kaplan-Meier-method)绘制生存曲线，对数秩检验(Log-ranktest)比较上述位点不同基因型携带者无复发生存时间、总生存时间的差异，单因素/多因素Cox比例风险回归模型分析细胞因子基因多态性与肝癌预后的关联。所有统计检验均为双侧概率检验，检验水准α=0.05。 结果(1)％2检验结果显示，在263例接受根治术切除患者中，IL-6-572与大体分型有关，IL-1B-1464、IL-10-592与肿瘤位置有关，TNF-α-1031与肿瘤直径大小有关，IL-10-592与肝硬化有关，IL-1B-511～IL-1B-31、IL-6-572与子灶有关，IL-1B-1464、IL-12B-1188与有无包膜有关(均有P＜0.05)。在94例非手术治疗患者中，TNF-α-1031、TNF-α-863、IL-1B-511与肿瘤位置有关，IFN-γ-5171与子灶有关，IL-12B-1188、TNF-α-863与门脉癌栓有关(P＜0.05)。 (2)单因素Cox回归分析显示，TNF-α-863SNP、TNF-α-1031SNP与HCC根治术后患者OS有关(P＜0.05)。14个细胞因子位点基因多态性与HCC根治术后患者RFS、非手术治疗患者OS均无统计学关联(P＞0.05)。 (3)多因素Cox回归分析结果显示，TNF-α-863C等位基因(CC+CA)是HCC根治术后患者总体生存时间的重要影响因素，携带TNF-α-863C等位基因患者死亡风险是AA基因型的0.586倍(95％CI=0.355～0.968)，C等位基因为保护基因。 (4)Th1、Th2通路基因联合基因型与肝癌临床特征无关(P＜0.05)，与术后患者OS/RFS无关，分层分析后亦未发现有统计学关联(P＞0.05)。 结论细胞因子基因多态性在肝癌发展进程中发挥重要作用，但可能与根治术后患者无复发生存时间、非手术治疗患者总生存时间无关:携带TNF-α-863C等位基因可延长肝癌根治性术后患者的总生存时间。
NETL