摘要
研究目的:1.研究大鼠动脉钙化模型和干预模型的建立，以及观察它们病理切片的不同表现。2.通过用免疫组化法，观察大鼠动脉钙化模型与其干预模型中，肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)与骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的定位和定性的情况，探讨还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)与TNF-α、OPG在动脉钙化发生发展过程中的作用及意义。3.通过使用实时荧光定量PCR法，观察大鼠动脉钙化模型与其干预模型中，TNF-α与OPG的mRNA表达量的情况，并探讨还原型谷胱甘肽与TNF-α、OPG在动脉钙化发生发展过程中的作用及意义。 方法:将30只SD雄性大鼠随机数字表法分成3组:正常对照组、钙化组、GSH治疗组,每组10只。参照Price等人的文献报道，用维生素D3诱导法建立大鼠动脉钙化模型。14天后，取大鼠主动脉分两部分，一部分石蜡包埋制成蜡块，用于做蜡块切片，另一部分妥善处理后冻存于-80℃冰箱，用于提取RNA。用苏木精-伊红(HE)染色法来观察各组大鼠动脉组织的病理改变，VonKossa染色(钙染色法)观察各组动脉中层膜组织中的钙盐沉积程度;免疫组化法观察各组动脉的TNF-α与OPG的定位和定性的情况;实时荧光定量PCR(Real Time PCR)法观察各组大鼠动脉TNF-α与OPG的mRNA表达量水平。 结果:1.在VonKossa染色结果中看到，钙化组大片的连续状黑色深染钙盐沉积，对照组的组织完整，无黑色深染，治疗组的钙盐沉积明显小于钙化组; 2.免疫组化与实时荧光PCR的结果显示，在成功建立的大鼠动脉钙化模型中，治疗组TNF-α免疫组化蛋白含量与mRNA表达量明显低于钙化组(P＜0.05)，对照组中的TNF-α免疫组化蛋白含量与mRNA表达量在三组中最低(P＜0.05); 3.免疫组化与实时荧光PCR的结果显示，在成功建立的大鼠动脉钙化模型中，治疗组OPG免疫组化蛋白含量与mRNA表达量明显高于钙化组(P＜0.05)，对照组中的OPG免疫组化蛋白含量与mRNA表达量在三组中最高(P＜0.05)。 结论:还原型谷胱甘肽在大鼠动脉钙化过程中，可抑制TNF-α的过表达，保护大鼠动脉组织，同时对OPG的表达可产生一定影响，减少OPG的消耗，与OPG一样拥有抑制大鼠动脉钙化形成的作用。
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