摘要
为了研究不同盐度条件下下枯草芽孢杆菌(B.licheniformis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、凝结芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、多粘类芽孢杆菌(B.coagulans)和侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporu)对不同弧菌(Vibrio)的抑制作用，进行了牙鲆(Paralichthys olivaceus)条件致病弧菌的分离鉴定、5种芽孢杆菌对弧菌的抑制和复配芽孢杆菌对弧菌的抑制等三部分实验。 一、条件致病弧菌的分离鉴定。从患病牙鲆体内分离到4株优势菌(Y1、Y2、Y3、Y4)，对分离株进行16SrDNA序列比对来确定分离株的生物学地位。结果显示，此次从患病牙鲆体内分离到的4株菌株(Y1、Y2、Y3、Y4)分别为:巨弧菌(vibrio giantis)、嗜环弧菌(Vibrio cyclitrophicus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和弗尼斯弧菌(Vibrio furnissii)。将以上4株弧菌作为本项研究的试验弧菌。 二、5种芽孢杆菌对弧菌的抑制作用研究。采用液态拮抗法和TCBS平板计数法探究枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌在不同盐度下的抑菌能力和最适使用浓度。实验组设置5、10、20和30盐度的水环境，以牛肉膏蛋白胨作为营养源，分别添加104、105、106cfu/mL浓度梯度的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌;添加以1∶1∶1∶1比例混合的巨弧菌、嗜环弧菌、溶藻弧菌和弗尼斯弧菌，混合弧菌浓度5.5×103cfu/mL。对照组除不添加益生菌外，其它与实验组一致。每个实验组设置3个平行，在室温条件下进行(17-25℃)，实验为期40d。结果表明:在不同盐度水环境下，104、105、106cfu/mL浓度的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌均对混合弧菌的生长有显著的抑制作用(P＜0.05)。地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制能力显著高于凝结芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌(p＜0.05)。不同菌种的最适使用浓度不同，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌在浓度为105cfu/mL时抑菌能力较强。多粘类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌在浓度为106cfu/mL时抑菌能力较强。除枯草芽孢杆菌外，地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌的抑菌能力均被盐度所影响，在0～30盐度范围内，盐度越高，抑菌能力越弱。 三、复配芽孢杆菌对弧菌的抑制作用研究。使用液态拮抗法和TCBS平板计数法探究枯草+地衣芽孢杆菌、枯草+凝结芽孢杆菌、枯草+多粘类芽孢杆菌和枯草+侧孢短芽孢杆菌的复配组合在不同盐度下的抑菌能力。实验组将枯草芽孢杆菌作为主要菌种，以7∶3的比例与地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌进行复配，水环境盐度梯度、芽孢杆菌和混合弧菌浓度梯度、对照组设置、其他条件与实验二相同，实验为期30d。结果表明:104、105、106cfu/mL浓度的枯草+地衣组、枯草+凝结组、枯草+多粘类组和枯草+侧孢短组在5、10、20和30盐度下，对混合弧菌的生长具有显著的抑制作用(p＜0.05)。枯草+多粘组和枯草+侧孢短组抑菌能力较强。不同菌种的最适使用浓度不同，其中，106cfu/mL组抑菌能力显著高于104和105cfu/mL组(p＜0.05);枯草+凝结芽孢杆菌组合105cfu/mL组抑菌能力显著高于104和106cfu/mL组(p＜0.05);枯草+多粘类芽孢杆菌组合106cfu/mL组抑菌能力显著高于104和105cfu/mL组(p＜0.05);枯草+侧孢短芽孢杆菌组合106cfu/mL组抑菌能力显著高于104和105cf/mL组(p＜0.05)。随盐度增长，4种芽孢杆菌复配组合抑菌能力均有逐渐减弱的趋势。
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