摘要
【目的】:胃癌作为最常见的消化道肿瘤之一，其死亡率在癌症中高居第二位，是严重影响我国人民健康的重要疾病。胃癌具有发病率高、转移率高等特点，侵袭和转移是胃癌的主要致死因素，但是胃癌的发生发展是一个极其复杂的过程，转移机制尚未完全阐明，因此进一步探讨和研究胃癌侵袭和转移的信号传导机制显得格外重要。我们在前期的研究中发现，细胞周期蛋白依赖性激酶5调节亚基相关蛋白3(CDK5RAP3,C53)的表达能够抑制胃癌的增殖、侵袭、迁移和移植瘤的生长并且与胃癌患者的预后密切相关。为研究C53的相关复合物，我们进行了质谱分析，结果显示C53与微小染色体维持蛋白6(MCM6)有较强的相关性，而MCM6作为一种与DNA复制相关的蛋白被证实与许多恶性肿瘤的发生发展密切相关，因此为进一步阐明C53在胃癌发展中的潜在机制，本课题拟探讨C53调控MCM6在胃癌发展中的作用及机制，为胃癌的治疗提供新的靶点和干预方法。 【方法】：首先，我们利用质谱分析和免疫共沉淀等方法研究C53与MCM6的相互作用；然后，我们利用包装好的慢病毒构建稳定敲除C53基因的胃癌细胞株AGS和HGC-27细胞，通过细胞功能回复实验，观察C53与MCM6共同对细胞增殖产生的影响；进一步，我们利用免疫荧光和核蛋白提取试验，研究C53与MCM6潜在的作用机制；最后，我们利用免疫组化和免疫荧光技术分析136对患者胃癌组织和相应癌旁组织中C53和MCM6的表达水平，并通过Kaplan–Meier生存函数和cox比例风险回归分析证明C53和MCM6表达对胃癌患者预后的影响及意义。 【结果】：质谱分析显示C53与MCM6有较强的相关性，并且C53可以与MCM6产生免疫共沉淀。而后，回复实验证实，沉默MCM6的表达能够逆转沉默C53后引起胃癌细胞增殖、侵袭和迁移作用。进一步，细胞免疫荧光和核质分离实验发现下调C53的表达能够促进MCM6向细胞核转移。最后，在对患者胃癌组织和相应癌旁组织分析中，我们利用免疫组化和免疫荧光技术进一步确认C53的下调可以促进MCM6向细胞核转移，并且通过Kaplan–Meier生存函数和cox比例风险回归分析发现C53和MCM6均为胃癌患者预后的独立危险因素，与胃癌的T、N、M分期密切相关。 【结论】：C53可以与MCM6结合并阻止MCM6由细胞质向细胞核转移，从而发挥抑癌作用。同时，C53和MCM6是胃癌患者预后的独立危险因素，并且与胃癌的T、N、M分期密切相关。
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