摘要
已有研究报道B细胞可通过刺激培养的方式发生永生转化，不依赖癌病毒感染和基因操纵，在操作简便性和安全性方面都更具优势，是获得天然人类抗体库的潜在有效方法。B细胞体外培养依赖CD40L的刺激活化，目前的研究主要采用饲养细胞提供膜结合型CD40L，但在使用前需要对其进行预培养和辐照以防止其过度生长，并且需要定期更换饲养细胞层，这对B细胞体外培养带来不稳定性且操作不便。因此，寻找一种非复制型的膜结合型人CD40L展示方法有可能作为替代饲养细胞支持B细胞体外培养的有效手段。 本研究通过构建人CD40L3T3过表达细胞系用以制备展示膜结合型人CD40L的囊泡，并在裂解方式、超声时间、初始细胞数量等方面进行摸索，对囊泡制备方案进行优化，通过电镜、纳米粒度分析仪以及基于荧光计数微球的流式细胞术对囊泡进行形态观察、粒度分析、绝对计数和稳定性评价。后续将人CD40L囊泡与多种细胞因子共同添加入B细胞体外培养条件中，通过显微镜观察、上清IgG分泌量检测、cck-8细胞活力检测等方式评估其对B细胞体外诱导培养的影响。 本研究利用表达人CD40L的3T3细胞系制备纳米囊泡，并进行优化和评价，通过外源添加人CD40L囊泡的方式取代了传统B细胞培养方法中的表达CD40L的饲养细胞，解决了传统基于饲养细胞培养体系存在的培养条件不稳定的问题。目前，基于CD40L囊泡联合多种细胞因子的B细胞体外培养平台已经初步建立，可以体外培养B细胞达30天以上，获得约5000倍的扩增，还在继续优化评价中。 本研究旨在构建不依赖病毒感染、遗传修饰和饲养细胞的B细胞体外诱导培养方法，其在安全性、操作简便性上更具有优势，为获得人源单克隆抗体提供了研究思路和方法。
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