摘要
寨卡病毒是一种新出现的蚊媒传播的病原体，属于黄病毒科黄病毒属，寨卡病毒感染能引发严重的神经系统并发症，包括新生儿小头症、先天性畸形和胎儿死亡以及成年人中的格林巴利综合征。自2007年寨卡病毒在雅浦群岛首次大规模爆发以来，迅速传播到了世界各地区，造成了数百万人的感染，严重威胁人类健康，这些严重爆发迫使世界卫生组织(WHO)于2016年将其列为全球紧急公共卫生事件。虽然目前对寨卡病毒的发病机制和免疫逃逸机制的研究正在进行中，但其宿主限制和免疫逃避的机制仍有许多未解的问题，且目前临床上还没有针对ZIKV的有效治疗或可用于预防的疫苗，故明确限制寨卡病毒的宿主因子及其作用的分子机制，对研发安全有效的治疗策略及可用于预防的药物、疫苗等尤为重要。 先天免疫反应是宿主防御病毒感染的第一道防线，Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)信号通路在抵御病毒感染中具有重要作用，一旦细胞感知到病原体入侵，便触发一系列的信号传导通路，最终引发数百种具有抗病毒和免疫调节功能的IFN刺激基因(ISG)的表达，从而起到抗病毒的作用。而研究发现，黄病毒非结构蛋白能够拮抗IFN-Ⅰ信号通路，从而使病毒逃避宿主的免疫反应，因此基于IFN-Ⅰ信号通路的抗病毒作用及黄病毒对IFN-Ⅰ信号通路的拮抗作用，本课题中我们拟初步探讨寨卡病毒非结构蛋白NS1/NS2/NS3对Ⅰ型干扰素信号通路诱导基因表达的影响。 在本研究中，我们通过寨卡病毒非结构蛋白NS1、NS3、NS4A表达质粒转染293T细胞，转染48h后收取细胞蛋白样品和细胞总RNA，采用Westernblot验证寨卡病毒非结构蛋白NS1、NS3、NS4A在293T细胞中过表达情况，同时使用人IFN-Ⅰ响应信号通路PCR阵列芯片对收取的这三组细胞总RNA样品进行检测，将获取的实验数据通过QIAGEN官网上的PCRArray数据分析网站在线分析其中表达显著上调或下降的基因，采用荧光定量PCR对基因芯片结果进行验证，同时通过寨卡病毒感染A549细胞，通过qPCR检测这些基因的表达变化是否与qPCR验证结果一致，并通过KEGG网站及文献查询这些基因参与的信号通路或某一重要基因对寨卡病毒复制作用的影响。 Westernblot证明寨卡病毒非结构蛋白NS1、NS3、NS4A能在293T细胞中过表达，使用人IFN-Ⅰ响应信号通路PCR阵列芯片对寨卡病毒非结构蛋白NS1、NS3、NS4A过表达后的细胞总RNA进行检测并验证发现，一共有7个Ⅰ型干扰素信号通路诱导基因的表达出现明显变化，包括IRF7、ISG20、CCL2、JAK2、DDX58、MYD88、TNFSF10。ZIKVNS1表达介导了IRF7、ISG20、JAK2、TNFSF10基因表达的变化，其中IRF7、ISG20基因表达升高，TNFSF10、JAK2基因表达降低。ZIKVNS3表达介导了DDX58、IRF7基因表达的变化，其中IRF7基因表达升高，DDX58基因表达降低。ZIKVNS4A表达介导了DDX58、CCL2、TNFSF10、MYD88基因表达的变化，其中CCL2基因表达升高，DDX58、TNFSF10、MYDS8基因表达降低。同时用寨卡病毒感染A549细胞，发现寨卡病毒感染后ISG20、IRF7、CCL2基因表达总体升高，MYD88基因表达总体降低，与芯片验证结果基本一致，而DDX58和TNFSF-10基因表达总体升高，与芯片验证结果不一致，JAK2基因8h前表达升高，随后表达降低。 总的来说，ZIKVNS1表达使IRF7、ISG20基因升高，TNFSF10、JAK2基因表达降低;ZIKVNS3表达使IRF7基因表达升高，DDX58基因表达降低;ZIKVNS4A表达使CCL2基因表达升高，DDX58、TNFSF10、MYD88基因表达降低。
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