摘要
由茄科雷尔氏菌引起的番茄青枯病是一种重要的土传病害，严重影响番茄种植区的产量和种植面积。目前市场上对番茄青枯病的防治没有高效的化学农药，而生物防治对环境影响小及不易产生抗药性等优点而日益受到人们的关注，逐渐成为研究的热点。本研究从广西不同地区采集不同农作物根围土样，分离得到一株防治番茄青枯病的生防菌，并对其防病机理进行初步研究。主要结果如下： (1)从广西不同地区采集的土壤样品中分离到2929株菌株。采用平板拮抗法进行筛选得到对茄科雷尔氏菌有拮抗活性的菌株146株，对菌株进行复筛得到7株具有较强抑菌活性的菌株。采用盆栽生测法从7株细菌中筛选得到对番茄青枯病防效较好的JX-1菌株。该菌株在使用浓度为1×108cfu/mL时，室内盆栽防治效果为80.89%，田间防效为55.03%。通过形态学、生理生化、16SrDNA和gyrB基因鉴定，将JX-1菌株鉴定为Burkholderiacepacia。另外，该菌抑菌谱较广，对多种植物病原真菌如：苦瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、香蕉煤纹病菌(Deightoniella torulosa)、高粱茎点霉菌(Phoma sorghina)、瓜腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)、棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)、姜白绢病菌(Sclerotium rolfsii)和柑橘拟茎点霉菌(Phomopsis citri)具有拮抗效果，其抑菌直径分别为：6.57mm、9.67mm、7.00mm、6.50mm、7.93mm、5.50mm、11.50mm；菌株JX-1对植物病原细菌如：番茄细菌性疹斑病菌(Pseudomonas syringae pv. tomato )和胡萝卜软腐病菌(Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum)则没有抑菌活性。 (2)菌株JX-1可产生多种抑菌次生代谢产物如蛋白酶、嗜铁素，但不产氢氰酸。PCR检测发现，菌株JX-1含有硝吡咯菌素(Pyrrolnitrin)和藤黄绿脓菌素(Pyoluteorin)相关合成基因prnC和pltC基因，但没有2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)相关合成基因。 (3)通过构建菌株JX-1的随机突变体库，筛选得到2株显著影响菌株JX-1 拮抗能力的突变体。其中突变体M645可提高对茄科雷尔氏菌的拮抗活性，抑菌圈直径为15.50mm，大于野生型JX-1的13.17mm；而突变体M1710则完全丧失对茄科雷尔氏菌的拮抗作用。对突变体的分析表明，突变体M645中Tn5破坏了gntR基因，而突变体M1710中Tn5破坏了pks/nrps基因。室内盆栽试验表明，突变体M645菌株的防治效果显著大于野生型JX-1，而突变体M1710菌株的防治效果显著低于野生型JX-1。遗传学试验进一步表明，互补gntR基因可以使突变体的拮抗效果恢复至野生型水平；而过表达gntR基因后菌株JX-1完全丧失对青枯菌的拮抗效果。 综上所述，JX-1菌株是一株对番茄青枯病菌具有较好抑菌活性，同时产生多种次生代谢产物和适用于防治番茄青枯病的生防菌。
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