摘要
目的 体外分离培养人多生牙来源根尖牙乳头牙细胞(apical papilla cells of human supernumerary teeth，APCs-S)与人多生牙来源牙髓细胞(dental pulp cells of human supernumerary teeth，DPCs-S)并对比二者生物学行为差异。构建无翼型MMTV整合位点家族成员5a(wingless-type MMTV integration site family member 5a ， Wnt5a)慢病毒载体，并感染APCs-S，探讨Wnt5a基因修饰对APCs-S生物学行为的影响。 方法 1、采用酶消化法对APCs-S与DPCs-S进行体外分离培养；CCK-8法对两种细胞第1、3、5、7天的吸光光密度(optical density, OD)值进行检测；矿化诱导后对APCs-S和DPCs-S行茜素红染色，观察矿化结节数量；成脂诱导后对APCs-S和DPCs-S行油红O染色，观察脂滴数。 2、利用Wnt5a慢病毒载体感染APCs-S，经嘌呤霉素筛选稳定株；采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, Real-time PCR)测定感染后APCs-S的Wnt5a的mRNA表达情况。感染后的APCs-S经成骨诱导培养，行碱性磷酸酶染色检测细胞的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase， ALP)表达水平；感染后的APCs-S经茜素红染色观察细胞矿化结节数量；通过Real-timePCR测定成骨诱导后两组细胞成骨相关基因的mRNA表达情况。 结果 1、采用酶消化法可在体外成功分离培养APCs-S和DPCs-S，二者细胞形态较佳。茜素红染色与油红O染色结果显示两种细胞均具有成骨分化与成脂分化能力。APCs-S增殖和矿化结节形成能力显著高于DPCs-S。 2、利用Wnt5a过表达慢病毒成功构建了稳定的Wnt5a过表达的APCs-S；Wnt5a过表达组的Wnt5a的mRNA相对表达量显著高于空载体对照组。ALP染色结果提示两组细胞均能表达ALP；茜素红染色结果显示Wnt5a过表达可促进APCs-S形成矿化结节；成骨诱导后，Wnt5a基因修饰APCs-S成骨相关基因ALP、Runt转录相关因子2(runt-related transcription factor 2, RUNX2)、骨涎蛋白(bone sialoprotein, BSP)的mRNA相对表达量均显著增加。 结论 1、从人多生牙分离培养得到的APCs-S和DPCs-S均具有良好的增殖能力及多向分化的潜能，APCs-S增殖能力和成骨分化能力优于DPCs-S，更适宜作为基因强化组织工程的种子细胞。 2、Wnt5a慢病毒载体可成功感染APCs-S，并促进APCs-S高表达Wnt5a。Wnt5a基因修饰可促进APCs-S成骨分化。
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