番茄青枯病(Tomato bacterial wilt)是世界上危害最为严重的土传植物病害之一，危害性极大。在保护环境的前提下，生物防治是降低该病发病率的有效途径之一。放线菌作为生物农药资源菌，这几年倍受关注，其菌制剂的应用在农业上也发挥着越来越重要的作用。由于合成的杀菌剂等化学试剂在控制病害方面具有局限性和危害性，因此，利用环境中存在的拮抗微生物，开发环保型和高效型的微生物制剂来代替化学农药，根除这一类病害也是目前人们关注的话题。另一方面单一菌株有诸多缺点，比如持续时间较短，不经济等，导致生防效果差且不持久，因此本实验从多菌组合的角度出发，对生防菌株进行多菌复配，构建复合菌株，后期进行了盆栽实验，定殖实验，生物有机肥制备等一系列研究，并在此基础上，为复合菌肥在防治土传病害方面提供可行性的理论依据。 本研究从山东省临沂市番茄根际土作为分离源，进行了放线菌的分离纯化，采用滤纸片的方法，以青枯病菌为指示性菌株筛选具有抗菌活性的菌株，6株具有较强抑菌活性的链霉菌，分别是NEAU-Z2、NEAU-D18、NEAU-88、NEAU-174、NEAU-C12和NEAU-66。并通过亲和试验，发现菌株NEAU-D18和NEAU-88具有良好的相容性，通过番茄苗期抗病试验、离体试验、盆栽试验等研究了复合菌(NEAU-D18+NEAU-88)对番茄青枯病的防治效果，另外并从营养竞争角度探讨复合菌株(NEAU-D18+NEAU-88)潜在的生物防治番茄青枯病的机制。后期以复合菌为研究对象，通过固体发酵方式制成复合生物肥，利用盆栽实验验证其生防效果，为尽快开发利用复合菌肥在实际生产中防治番茄青枯病提供参考。此外，对活性菌株NEAU-66进行了鉴定试验。主要实验结果如下: (1)选用六种分离培养基(CPA、DPA、SSA、HV、GS、AAG)对土壤中放线菌进行分离，经过形态观察和分子水平分析后合并，共筛选得到108株放线菌。共包括链霉菌属(Streptomyces)，韩国生工菌属(Kribbella)，诺卡氏菌属(Nocardia)，小单胞菌属(Micromonospora)，甲基杆菌属(Methylobacterium)，其中链霉菌属(Streptomyces)为优势菌属。 (2)对108株放线菌进行抗青枯病菌活性检测。共有4株菌株的孢子浸提液具有抑菌效果，分别是NEAU-88、NEAU-Z2、NEAU-C12和NEAU-66，它们对番茄青枯病具有较强的抑菌活性，抑菌区直径分别为25.16、15.32、17.78和13.00mm。另外两株NEAU-174和NEAU-D18由实验室提供，抑菌直径为24.46mm和24.51mm。 (3)将菌株NEAU-Z2、NEAU-D18、NEAU-88、NEAU-174、NEAU-C12和NEAU-66进行亲和性实验(NEAU-D18、NEAU-174为实验室提供)，筛选出彼此之间无抑制作用的菌株。结果表明，NEAU-D18和NEAU-88之间彼此亲和，复合菌株的抑菌直径为28.98mm。 (4)在苗期试验和盆栽试验中，复合菌株(NEAU-D18+NEAU-88)的生防效果明显优于单一生防菌株(P＜0.05)，苗期实验中，当用浓度108CFU/mL且NEAU-D18:NEAU-88比例为1∶1时，混合菌株孢子悬浮液的防效最佳，在盆栽实验中，混合菌株(NEAU-D18+NEAU-88)的生防效果(70.10％)显著高于单一菌株NEAU-D18(47.30％)和菌株NEAU-88(51.29％)。 (5)营养竞争实验表明，NEAU-D18，NEAU-88以及彼此组成的复合菌株与青枯菌株QL-Rs1115具有营养相似性，测得NOI值分别0.71、0.82和0.88。并且表明混合菌株在理论上比单一菌株更具竞争力。 (6)通过固体发酵基质的筛选，确定两株菌的最适固体发酵基质为蚯蚓粪和麦麸，且两者比例为2∶1，后期对混合菌株进行固体发酵培养条件优化，得到最佳发酵条件，分别是接种量10％，含水量60％，温度28℃，并且在发酵7天时，复合菌株的孢子量达到最大。然后将发酵的产物制成的生物菌肥进行盆栽实验，生防效果为76.41％。 (7)菌株NEAU-66的多相分类学鉴定。通过16SrRNA基因序列比对，生理生化特征、不同培养基的培养特征、形态特征以及化学成分分析，确定该菌株为链霉菌属内一株潜在新种。
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