摘要
目的: 汉防己碱(Tetrandrine，TET)具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤及抑制新生血管等多种药理作用，研究报道汉防己碱有抗角膜新生血管作用。但是该药不溶于水的性质限制了其在眼科临床中的应用。本研究制备汉防己碱纳米乳(TET-ME)滴眼液并对其进行处方优化，评价其理化性质，考察体外释放规律，汉防己碱纳米乳滴眼液在兔眼单次点眼后的眼部药代动力学特征，为汉防己碱纳米乳滴眼液的开发提供理论依据。 方法: 首先测定汉防己碱在不同辅料中的溶解度，筛选合适的脂质、表面活性剂和助表面活性剂。通过滴定法制备TET-ME。考察对象设为药物/脂质(X1)和脂质/表面活性剂(X2)，评价指标设为粒径(Y1)和包封率(Y2)，采用星点设计-效应面法(CCD-RSM)计算获得TET-ME的最佳处方。TET-ME的体外释放曲线通过正向透析法测定。选择新西兰大白兔健康无眼疾兔眼为模型进行眼部刺激性考察。单次给予50μL0.2％TET-ME滴眼液于右眼结膜囊内，50μL生理盐水于左眼结膜囊内，作为自体左右眼对照。在给药后设定时间点进行目视及裂隙灯检查，评估眼刺激征，评价0.2％TET-ME滴眼液的兔眼刺激性。建立高效液相色谱法(HPLC-UV)在兔眼泪液和组织中的测定方法并进行方法学考察。在TET-ME滴眼液兔眼药代动力学研究中，取42只健康无眼疾新西兰大白兔，随机分为实验组和对照组，每组继续分为7个小组，代表不同给药时间。实验组兔子双眼单次点眼0.2％TET-ME滴眼液50μL，对照组双眼单次点眼0.2％汉防己碱混悬液(TET-SUSP)滴眼液50μL。分别于给药后0.1h、0.5h、1h、2h、4h、8h、12h后采集泪液样品，处死动物后采集结膜、角膜和房水样品。采用高效液相色谱法测定各样品中TET的浓度。数据采用SPSS22.0进行统计学分析，药动学参数采用药动学软件DAS2.1.1处理。 结果: 根据溶解度结果选择油酸为脂质，聚氧乙烯40氢化蓖麻油(RH40)为表面活性剂，甘油为助表面活性剂。通过CCD-RSM获得的最佳处方为:汉防己碱0.08g、油酸0.288g，RH402.88g，甘油0.56g，加水定容至40ml。最终制备的汉防己碱纳米乳滴眼液外观澄清透明，有淡蓝色乳光。pH为7.04±0.02，渗透压为312±3mOsm/L。平均粒径为8.94±0.10nm，多分散指数(PDI)为0.338;平均电位为-0.055±0.055mV;包封率为（97.50±0.6）％，载药量为（0.86±0.18％）。体外释放呈现先快后慢的特征，其体外释放规律符合一级释放动力学方程。兔眼的刺激性考察研究表明0.2％TET-ME滴眼液对兔眼无刺激性。药物在泪液、结膜、角膜中专属性良好，无内源性物质干扰。批内与批间的相对标准偏差(RSD)均＜5％，回收率均在92％～107％范围内，验证了兔眼内检测方法的精密度和适用性。兔眼药代动力学考察，实验组和对照组中TET在泪液、角膜、结膜中达峰时间（Tmax）均为0.1h。泪液中实验组达峰浓度(Cmax)为189.71±54.45μg/g，对照组Cmax为113.49±35.34μg/g，实验组为对照组的1.65倍，实验组泪液在每个时间点的药物浓度均大于对照组(P＜0.05)，实验组药物泪液中浓度-时间曲线下面积(AUC0-12h)是对照组的2.27倍。角膜中实验组Cm积为51.46±12.65μg/g，对照组Cmax为16.53±5.61μg/g，实验组为对照组的3.11倍，实验组角膜在每个时间点的药物浓度均大于对照组(P＜0.05)，实验组AUC0-12h是对照组的5.36倍。结膜中实验组Cmax为43.8±8.66μg/g，对照组Cmax为12.5±3.50μg/g，实验组为对照组的3.50倍，实验组结膜的在每个时间点药物浓度均大于对照组(P＜0.05)，实验组AUC0-12h是对照组的4.50倍。 结论: 汉防己碱纳米乳(TET-ME)滴眼液具有制备方便、粒径小、包封率高等特点，可以有效提高药物的眼部生物利用度。汉防己碱纳米乳滴眼液作为一个新型的眼部药物递送系统，对兔眼无刺激性，且显著提高了角膜中的药物浓度。TET-ME滴眼液为汉防己碱的眼部应用提供了新方法、新思路。
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