摘要
目的: 本研究目的在于观测达沙替尼对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化能力的作用效果，并于分子水平探讨其可能存在的调控机制。 方法: 1、组织块贴壁法获取人牙周膜干细胞，流式细胞术检测其表面间充质干细胞标记物表达情况，结晶紫染色检测其克隆性增殖能力，综上判断其是否是间充质来源干细胞。 2、茜素红染色检测细胞体外成骨诱导分化能力，油红O染色观察成脂诱导下脂滴形成情况，综上判断其是否具有多向分化潜能。 3、CCK-8细胞活性检测技术检测梯度浓度达沙替尼对人牙周膜干细胞增殖活性的影响;细胞学显微镜下观察梯度浓度达沙替尼对人牙周膜干细胞细胞形态的影响;qRT-PCR及Western Blot技术检测增殖及凋亡相关因子（Erk、Akt、Bcl2等）的表达变化情况。 4、ALP染色和茜素红染色鉴定梯度浓度达沙替尼对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响;Western Blot技术检测成骨相关指标(COL-1、RUNX2)以及EID3的表达变化情况。 5、Western Blot技术检测成骨诱导前后EID3的表达变化情况。 6、慢病毒转染构建特异性敲低EID3的人牙周膜干细胞模型，荧光显微镜下观察其转染情况，Western Blot技术检测其干扰效率。 7、ALP染色和茜素红染色观察比较特异性敲低EID3对达沙替尼诱导下人牙周膜干细胞成骨向分化能力的影响;Western Blot技术检测成骨相关指标(COL-1、RUNX2)的表达变化情况。 结果: 1、所获得的细胞群是源于间充质的、具有优秀增殖活性和多向分化潜能的hPDLSCs，符合后续研究需求。 2、达沙替尼对人牙周膜干细胞增殖活性的影响呈浓度依赖性和时间相关性，500nM以上浓度会严重损害人牙周膜干细胞的增殖能力。 3、达沙替尼对人牙周膜干细胞成骨分化能力的作用效果与浓度呈负相关。lnM浓度达沙替尼表现为促进成骨分化现象，高于5nM浓度时转为抑制其早期成骨指标表达，以RUNX2较为明显。10nM浓度以上才会表现出碱性磷酸酶及钙盐沉积的明显减少。 4、EID3参与人牙周膜干细胞的成骨分化进程，并于其中发挥负向调控作用。特异性干扰EID3后可观察到成骨指标的上调。 5、EID3参与高浓度(10nM)达沙替尼调控的人牙周膜干细胞成骨分化改变，特异性干扰EID3后可观察到，10nM达沙替尼下的抑制成骨效果有所缓解。 结论: 达沙替尼对人牙周膜干细胞增殖与成骨分化能力的影响呈浓度依赖性。低浓度下的达沙替尼对人牙周膜干细胞的增殖活性及成骨分化有促进作用。EID3可负向调节人牙周膜干细胞的分化，且参与调控高浓度下达沙替尼对人牙周膜干细胞的成骨抑制。
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