摘要
日前恶性肿瘤主要以化疗药物治疗为主。以顺铂(Cisplatin)为代表的二价铂类药物是较为常见的临床化疗药物，在有效治疗癌症的同时，其较大的副作用和较低的生物利用度以及严重的毒副作用限制了进一步的应用。以顺铂为首的二价铂药的作用方式是与细胞核内DNA相交联从而导致细胞转录异常以及死亡。脱嘌呤/嘧啶核糖核酸内切酶(APE1)是碱基切除修复(BER)途径中的必需关键酶，在多数肿瘤细胞内过表达。APE1能够修复DNA损伤进而保护肿瘤细胞免受伤害，并且增强了耐药性。通过抑制APE1的表达，可以降低肿瘤细胞的自我抵抗能力，有助于增强与核酸相互作用药物的药效。 受其启发，在此课题中我们将小分子铂类药物与基因药物APE1siRNA相结合，构建了一种新型智能核酸纳米载药体。在验证了抑制APE1蛋白的表达可有效克服铂类药物的耐药的基础上，我们设计了一种刚性核酸纳米结构作为药物的载体骨架。此结构上设计了三个功能模块:抑制APE1蛋白表达的小干扰RNA(siRNA)，阻滞肿瘤细胞自我修复克服耐药;以及实时监测APE1表达水平的核酸探针;靶向肿瘤细胞高表达核仁素的AS1411适配体。之后小分子铂类药物（二价铂药顺铂和四价铂前药C8-Cispt）与制备的核酸纳米载药体共同孵育使其连接，完成制备。铂类药物与核酸纳米载药体主体结构的腺苷与鸟苷的N7位置相连。通过凝胶电泳和原子力显微镜等观察到其合成情况较好，较为稳定。通过体外荧光实验确定了其核酸探针检测APE1的灵敏度较好，且不易被细胞内的核酸酶降解。进一步通过细胞荧光实验验证了核酸纳米载药体中APE1siRNA和APE1蛋白探测探针共定位情况较好，皮尔森系数为0.77。并且通过APE1监测模块可以观察到在随时间的递增，APE1的抑制效果增强。之后通过细胞毒性实验验证了核酸纳米载药体较好的治疗效果，负载四价铂前药C8-Cispt的核酸纳米载药体半抑制浓度(IC50)低至0.74μM。最后我们通过小鼠抑瘤实验进一步地验证了其良好的治疗效果和较高的安全性。 这种新型智能核酸纳米载药体不仅克服了铂类药物的耐药问题，并且利用核酸纳米载药体提高了其载药量，靶向肿瘤细胞精确释放，显示了在体外和体内的特异性监控与治疗，为克服肿瘤复发和治疗逃逸带来了巨大的希望。
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