摘要
仔猪黄白痢多发生于仔猪初生及断奶前后，是规模化猪场最常见的猪病之一，也是最难根治的一种传染病。发病仔猪临床表现为食欲不振，消瘦，拉稀薄的黄痢或黏稠的白痢，严重甚至会引起死亡。该病主要病原是产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)，ETEC的主要致病因子是两种肠毒素，分别是耐热肠毒素(heat stable enterotoxin,ST)和不耐热肠毒素(heat labile enterotoxin，LT)，它们会引起仔猪腹泻，甚至死亡，严重影响养猪业的健康发展。由于ETEC具有较高的耐药性和致病性，其对养猪业的威胁需要引起高度重视。 本研究经调查安徽部分地区规模化猪场仔猪黄白痢流行情况，分析ETEC致病因子、耐药情况以及血清型等生物特性，制备相应的灭活疫苗，研究其对小鼠免疫效果，为安徽部分地区规模化猪场ETEC的有效防治提供依据。 1.安徽部分地区猪场仔猪ETEC的分离鉴定及血清型分析 在安徽6个地区17个规模化猪场采集初生到断奶后仔猪新鲜粪便、直肠拭子等479份，经麦康凯琼脂(MacConkey agar,Mac)增菌划线、单菌落形态鉴定、16S rRNA和特异性毒力基因的PCR鉴定及测序，分离得到110株ETEC，其中同时含有ST和LT基因的6株，仅含ST基因的97株，仅含LT基因的7株。 通过PCR和血清凝集试验对110株ETEC菌株进行血清型鉴定，共定型52株，占总菌株数的47.3％。鉴定出的血清型主要有O8、O20、O128、O15、O25、O114、O3、O9、O137和O141等13种血清型，其中O8，O20，O128为优势血清型，分别占26.9％(14/52)，21.2％(11/52)和11.5％(6/52)。在6个地域均存在优势血清型。 2.安徽部分地区猪场仔猪ETEC耐药性及毒力测定 使用13种药敏纸片对110株ETEC进行耐药分析，试验结果表明，多重耐药分布广泛，10重耐药及其以上的菌株占比为38.1％(42/110)，多集中于安徽中南部地区猪场。大部分对红霉素，强力霉素，阿莫西林，甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和四环素等高度耐药，耐药率均高达90％以上，如:红霉素94.5％(104/110)，强力霉素100％(110/110)，阿莫西林91.8％(101/110)，甲氧苄啶/磺胺甲恶唑94.5％(104/110)和四环素97.3％(107/110)。有51.8％(57/110)的菌株对头孢噻肟敏感，47.3％(52/110)的菌株对恩诺沙星敏感，对多粘菌素B的敏感率最高，达90％(99/110)。 对31株优势血清型ETEC菌株进行毒力测定，其中O8血清型菌株14株，O20血清型菌株11株，O128血清型菌株6株，腹腔注射剂量为5×107CFU/只，每株菌攻毒6只小鼠。试验结果显示，O8血清型中有7株强毒株，O20血清型中有8株强毒株，O128有4株强毒株。选择O8强毒株FXYD4-1进行半数致死量(LD50)和最低致死量(MLD)的测定，结果显示O8强毒株FXYD4-1的LD50为5.1×106CFU/只，MLD为3×107CFU/只。 3.仔猪黄白痢灭活疫苗制备及对小鼠的免疫效果研究 用优势血清型的强毒株和弱毒株分别制备单价灭活疫苗，其中包括O8血清型强毒株FXYD4-1和弱毒株QJZX2制成的疫苗、O20血清型强毒株FDDS1和弱毒株FXYQ1制成的疫苗以及O128血清型强毒株QJFXW2-2和弱毒株YQBYZ2-4制成的疫苗，分别以2×108CFU/只腹腔免疫四周龄小鼠，一免后两周二免，二免后一周攻毒，攻毒菌株选择优势血清型强毒株，攻毒剂量为5×107CFU/只，结果表明，血清型O8强毒株FXYD4-1灭活苗对小鼠的保护率在66.7％(2/6)以上;而血清型O20弱毒株FXYQ1制备的灭活疫苗对小鼠的保护率在83.3％(1/6)以上;FXYD4-1和FXYQ1制备的灭活疫苗对O128血清型菌株攻毒小鼠的保护率均达100％。因此，进一步选取O8血清型强毒株FXYD4-1和O20血清型弱毒株FXYQ1混合制成二价灭活苗，对小鼠进行腹腔免疫，免疫剂量为2×108CFU/只，结果显示二价灭活苗对小鼠的保护率在50％以上(3/6)。对免疫前后小鼠血清中的抗体效价测定，表明一免后抗体效价有所上升，二免抗体效价显著高于一免抗体效价。
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