摘要
山羊地方性鼻内腺瘤(Enzootic nasal adenocarcinoma of goat, ENAG)是由地方性鼻内肿瘤病毒2型(Enzootic nasal tumour virus 2, ENTV-2)感染山羊鼻内筛骨与鼻甲骨上皮黏膜组织引发的一种接触性传染病，在全球多地均有发生，近年我国也有较多报道，但在广西广东地区尚未见到，此外病毒检测方法比较紧缺、对当地病毒株全基因序列特征一无所知。因此在两广地区开展本病调查及相关研究，对养羊业健康发展具有重要意义。本论文进行了下列研究。1.流行病学调查：在2018～2019年间，走访调查广西广东地区19个羊场11250只山羊，从有流鼻等呼吸道症状的山羊中采集210份病料进行ENAG检查，经普通PCR检测，结果发现10只山羊为核酸阳性，阳性率为4.8%，经临床检测、回访，除4只被宰杀外，其余6只山羊在一年内因此病死亡。选取广西都安、北海、南宁市，广东揭阳市山羊养殖场的ENAG疑似山羊4只，通过临床症状、病理剖检、病理组织学并结合普通PCR方法将该病确诊为ENAG。本实验证明ENAG在我国广西广东地区存在着一定的流行。2.建立了一种定量检测ENTV-2的SYBRGreenIRT-qPCR方法，该方法的靶基因为gag基因，它的最低检出限为3.36×101copies/μL，比普通的PCR方法敏感度高100倍，无非特异性扩增和引物二聚体，组内和组间变异系数分别为1.58%, 1.82%。本研究建立的检测方法与临床上山羊常见的病原(山羊口疮病毒、小反刍兽疫病毒、山羊痘病毒、口蹄疫病毒)和内源性的反转录病毒没有交叉反应。应用该方法和普通PCR方法对上述210份临床样品进行检测，其阳性率分别为6.2%、4.8%，说明该方法的检出率更高。3.对广西和广东地区获得的4株ENTV-2进行全基因的分段克隆、序列测定、拼接，得到4株ENTV-2基因全序列分别命名为ENTV-2DA0、BH、MC、JY株，其基因组长度分别为7325bp、7319bp、7319bp、7325bp，4株ENTV-2全基因序列之间的核苷酸相似度为96.4～99.2%。4株ENTV-2广西广东流行株与ENTV-2-FJ福建株的同源性最高(96.2～98.9%)，与ENTV-2-UK株之间的同源性最低(89.4～89.7%)。病毒基因序列差异部分主要集中在LTR基因的U3和U5区域，gag基因的VR1和VR2区域，pol基因的orf-x区域和env基因的TM蛋白编码区域。结论：本研究证实了山羊地方性鼻内腺瘤疾病在我国广西广东地区存在，建立了以gag为靶基因的检测ENTV-2的SYBRGreenIRT-qPCR方法，获得了4个ENTV-2代表性毒株的全基因序列。今后应进一步继续开展更广范围的羊群ENAG调查、完善检测技术、筛查和诊断病羊、净化羊群，为山羊健康养殖提供技术支持。
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