摘要
禽偏肺病毒病是由禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus，aMPV)引起的鸡或火鸡的一种急性上呼吸道病，该病在世界范围内广泛流行。血清学调查结果显示，我国部分鸡群的aMPV血清阳性率高达100％，病原学检测结果显示，我国鸡群中的流行毒株以B亚型aMPV为主。aMPV单一感染时，死亡率不高，但易造成其他病原的继发感染。若出现其他细菌或病毒的继发感染，死亡率可高达25％～40％。aMPV感染能够造成肉鸡的肿头综合征以及蛋鸡产蛋量和蛋品质的下降，造成巨大的经济损失，严重影响家禽养殖业的健康发展。国外主要通过疫苗免疫来防控禽偏肺病毒病，而我国目前还没有用于该病防控的疫苗。本研究以实验室前期从我国鸡群分离的aMPV/BLN16株为基础，研制了B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗，并对其安全性和免疫保护效力进行了系统评估。 我们将B亚型aMPVLN16株在Vero细胞上连续传代至15代，并对不同代次的病毒进行了半数组织培养感染量测定、纯净性检验及免疫原性比较。根据免疫效力实验结果，我们以B亚型aMPVLN16株11代毒(LN16-1株)作为免疫原，通过灭活条件及乳化工艺的筛选，研制了B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗。单剂量、单剂量重复及大剂量免疫实验结果显示，该灭活疫苗具有良好的安全性，免疫后无不良反应且注射部位无炎症反应。SPF鸡免疫实验结果表明，该疫苗能够诱导机体产生高滴度的抗体，促进PBMC中B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖以及脾脏IL-4和IFN-γ细胞因子的分泌，同时对B亚型aMPV强毒攻击提供80.0％以上的免疫保护，并显著降低鼻腔拭子中的病毒载量，避免强毒攻击后鼻甲的病理损伤。 攻毒保护实验结果表明，该灭活疫苗3周龄单次免疫的保护率为77.8％;3周龄首免，6周龄加强免疫的保护率为100.0％。因此，我们将免疫程序设定为3周龄初次免疫，6周龄加强免疫。最小免疫剂量实验结果表明，该灭活疫苗以不低于0.25mL/只的剂量免疫SPF鸡，加强免疫3周后可提供87.5％以上的免疫保护，因此将最小免疫剂量定为0.25mL/只，为保证临床免疫保护效果，推荐免疫剂量为0.50mL/只。免疫持续期实验结果表明，该灭活疫苗加强免疫后2、3、4、5、6个月攻毒，保护率分别为100.0％、90.0％、100.0％、90.0％和88.9％，初步确定该疫苗的免疫持续期为6个月。此外，该灭活疫苗对大日龄(17周龄)SPF鸡能够提供100.0％的保护。 进一步评价了该灭活疫苗对商品蛋鸡和商品肉鸡的免疫保护效果。致病性实验结果表明，B亚型aMPVLN16强毒株对商品蛋鸡及商品肉鸡具有显著的致病性:商品蛋鸡及商品肉鸡在感染后出现流鼻涕以及鼻痂等症状，发病率分别为92.3％及100.0％;鼻腔拭子、鼻甲、喉头、气管以及哈德氏腺中可检测到病毒;感染后9d可造成商品蛋鸡和商品肉鸡的鼻甲、气管及肺脏出现不同程度的病理损伤。该灭活疫苗加强免疫后，能够诱导商品蛋鸡及商品肉鸡产生高滴度的血清抗体。加强免疫后3周用B亚型aMPVLN16强毒攻击，该疫苗能够显著降低鼻腔拭子中的病毒载量并减轻强毒攻击后呼吸器官的病理损伤，免疫组商品蛋鸡及商品肉鸡的保护率分别为100.0％及88.9％。 本研究研制了禽偏肺病毒(B亚型)灭活疫苗，并证实其具有良好的安全性及免疫原性，该疫苗能对SPF鸡、商品蛋鸡及商品肉鸡提供良好的免疫保护。这些研究结果为我国禽偏肺病毒病的有效防控提供了技术支撑。
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