摘要
微藻是生产具有多种高附加值经济产品的原料，在解决生物能源资源危机方面有着重大意义。继代培养是最常见的藻种保存技术之一；近年来，超低温保存技术在植物种质保存和脱毒等方面应用越来越广泛。超低温保存微藻也成为了微藻研究领域研究的重要方向。 本文采用莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)作为研究对象，选取不同的保存方法，通过分析材料的预处理、保存时间、接种量、高渗溶液组分和脱水保护等环节可能存在的条件，找到最合适的微藻藻种保存方法及使成活率达到较高的最佳条件。所取得的实验结果如下： 1.采用继代保存法来对莱茵衣藻成活率进行实验，通过三种方法进行继代保存，并运用单因素实验，得到最佳保存条件，结果表明：最佳的保存条件为，固-液继代保存法、保存时间1个月、接种量10%。 2.采用复配保护剂在超低温处理的基础上进行梯度降温，采用响应面法优化超低温保存莱茵衣藻的保存工艺条件，结果表明：复配保护剂的含量为蔗糖浓度30%，乙二醇浓度15%，蔗糖浓度5%，此条件下的莱茵衣藻平均成活率为44.30%。 3.采用甲醇作为超低温保护剂，单因素实验表明：结果表明：莱茵衣藻最适宜的保存条件为：甲醇浓度为4%、7℃处理时间为30 min、解冻温度为35℃、离心速度为1000 r/min。在单因素实验的基础上，进行正交实验。结果表明，影响成活率的因素依次为：解冻温度>处理时间>离心速度>甲醇浓醇，最佳的保存条件组合为 A1B2C2D2，即甲醇浓度4%、处理时间30 min、解冻温度35 min、离心速度1000 r/min，莱茵衣藻成活率达69.66%。 综合上述实验结果，选择对数生长期的莱茵衣藻用甲醇作为超低温保护剂在采用先梯度后降温再投入液氮处理，能使莱茵衣藻成活率达到最高。
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