摘要
第一部分GTF2I基因多态性与中国汉族人群类风湿性关节炎关联研究 背景：类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一类常见的系统性自身免疫疾病，以慢性滑膜炎症、关节骨和软骨的破坏、关节功能丧失为主要特征。RA患者的自身免疫系统会错误地攻击健康组织，持续性的疾病活动还会导致神经疾病、心血管疾病等多种并发症，是人们失去劳动力和致残的主要原因，严重时危害生命。RA的发病机制尚未阐明，但大量研究表明遗传因素在RA的发病中起到重要的作用。GTF2I基因编码转录因子II-i(transcription factor II-i，TFII-i)，参与多种信号通路，在基因转录中起到重要的调节作用。GTF2IRD1-GTF2Iloci是亚洲人群中特有的易感基因区域，其单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism，SNP)位点rs117026326和rs73366469分别与干燥综合征(Sjogren Syndrome，SS)和系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)易感性有较强的关联性。近期的GWAS研究表明，rs117026326、rs73366469与亚洲人群中RA的发病相关，但是它们与中国汉族人群RA的关联性尚未得到验证，并且GTF2IRD1-GTF2I基因影响RA的机制尚不明确。 目的：本研究旨在探究GTF2IRD1-GTF2Irs117026326和rs73366469SNPs与中国北方汉族人群RA的关联性，进一步探究GTF2I基因在RA发病中的作用，以及该基因影响RA易感性的潜在机制。 方法：我们于吉林大学第一医院收集了240例RA患者和760例健康对照，通过磁珠法分离全血中基因组DNA，使用TaqMan实时定量PCR鉴定SNP位点基因型；利用Ficoll密度梯度离心法分离血液中外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)，进行RNA提取和逆转录，利用Real-timeqPCR技术检测GTF2ImRNA表达水平；提取EBV细胞系、Jurkat细胞系、U937细胞系和K562细胞系的核蛋白提取物，利用凝胶迁移实验(EMSA)探究SNP位点多态性与结合核蛋白提取物能力的关联。 结果：1、rs117026326和rs73366469的等位基因频率和基因型频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡检验(PHWE＞0.05)；2、rs117026326在健康对照和RA中，C等位基因频率分别是0.850和0.774，T等位基因频率分别为0.150、0.226，均具有显著差异(P＞0.05)；rs73366469在健康对照和RA患者中，T等位基因频率分别为0.815和0.736，C等位基因频率0.185和0.264，均具有显著差异(P＞0.05)，rs117026326和rs73366469均与中国北方汉族人群RA的易感性相关(OR=1.632，P=0.001；OR=1.599，P=1.32×10-4)；3、在RA患者的PBMC中，rs117026326和rs73366469的多态性与GTF2ImRNA表达水平均不相关(P＞0.05)；4、在EBV细胞系、Jurkat细胞系、U937细胞系和K562细胞系的核蛋白提取物中，rs117026326和rs73366469的多态性均不影响其与核提取物的结合。 结论：rs117026326的等位基因T和rs73366469的等位基因C与中国北方汉族人群RA的易感性增加相关，rs117026326和rs73366469位点多态性与GTF2ImRNA表达水平不相关，也与其结合核蛋白提取物的能力不相关。 第二部分TNIP1基因多态性与中国汉族人群乙肝病毒感染关联研究 背景：肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是全球第五大常见恶性肿瘤，中国肝癌的发病率和死亡率占全球50%以上，其中超过80%的肝癌是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)慢性感染引起的。HBV感染是世界最常见的慢性病毒感染之一，全球约有2.57亿HBV慢性感染者，每年约有100万人死于HBV感染相关的肝脏疾病。在宿主遗传因素与HBV感染相关性的研究中，发现炎症因子中的多个单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism，SNP)与HBV感染相关。TNIP1SNPs与许多自身免疫病和肝脏疾病相关。TNIP1rs2233290会导致ABIN1氨基酸的改变(151Pro→Ala)，rs2233290与慢性HBV感染的关联性尚无报道。 目的：本研究旨在探究TNIP1rs2233290与中国北方汉族人群慢性HBV感染的关联情况，进一步探究该SNP在慢性HBV感染中的作用及潜在机制。 方法：我们于吉林大学白求恩第一医院收集了100例慢性HBV感染者，通过磁珠法分离全血中基因组DNA，使用Sanger法鉴定SNP位点基因型；通过瞬时转染法将rs2233290不同基因型的质粒转染进HepG2细胞中，利用Westernblot技术和qPCR检测ABIN1蛋白表达量和TNIP1mRNA表达量；使用TNFɑ诱导转染后细胞，通过Westernblot检测内源IκBɑ、p-IκBɑ表达量，寻找合适的NF-κB诱导条件；共表达A20蛋白和rs2233290不同基因型的质粒，探究rs2233290风险变异对NF-κB通路的影响。 结果：1、在100例慢性HBV感染者中，rs2233290MAF=0.005<0.01，不具有统计学意义。2、将不同基因型TNIP1基因转染至HepG2细胞后，与G/G(Non-risk)基因型和C/C(Risk)基因型之间ABIN1蛋白表达量和TNIP1mRNA无显著差异。3、利用TNFɑ诱导HepG2细胞NF-κB信号，20ng/mlTNFɑ诱导2h是最适诱导条件，G/G(Non-risk)基因型和C/C(Risk)基因型表的蛋白均可以抑制NF-κB信号通路，但两者之间无显著差异。 结论：TNIP1rs2233290在中国北方汉族人群慢性HBV感染者中不具有统计学意义，rs2233290的G/G基因型和C/C基因型对ABIN1蛋白的表达量和NF-κB通路调控作用均无显著差异。
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