摘要
目的： 一直以来，结直肠癌的发病率居于前列，并且其具有隐匿性的特点，所以一旦确诊便已多是中晚期。众所周知，结直肠癌在其发生和发展当中并不是一个简单的过程，通常是多步骤、多基因的参与。因此，能够找到可以作为疾病病情监测、疗效预测的标志物，可以帮助患者提高生存率，以及评估疗效的目的。此次研究运用蛋白质组学的方法筛选出结直肠癌中的差异蛋白，将FGG蛋白选作本次目的蛋白，联合应用生信分析、免疫组化等多种方法，分析并且探讨在结直肠癌中FGG蛋白的表达情况以及应用价值。 方法： 1.应用液质联用技术建立差异蛋白表达谱：①组织样本取材：所选样本为我院23例结直肠癌患者标本。②将上述所得样本的癌组织、癌旁组织，按照操作流程进行组织蛋白的提取，之后再将所提取物制作成多肽混合物。③应用液质联用技术进行分析。 2.大量阅读文献、查阅相关资料选定FGG蛋白作为本次研究的目的蛋白。应用Westernblot进一步验证FGG在结直肠癌中的差异表达情况。 3.应用免疫组化的方法，研究结直肠癌组织中FGG蛋白的差异表达情况。 4.利用生信分析的手段，查找并分析相关数据库：STRING数据库、COSMIC数据库、Oncomine数据库、c-BioPortal数据库、COEXPEDIA数据库，探究FGG与结直肠癌的联系。 结果： 1.应用液质联用技术，比较后并分析，得到44个差异蛋白，其中23个表达下调，21个表达上调，所选FGG蛋白为表达上调。 2.Westernblot结果显示，相较于癌旁组织，在结直肠癌中FGG蛋白的表达明显升高。 3.免疫组化结果：所收集的18例样本中，由于后续试验过程导致样本流失，共有16例结直肠癌组织、15例癌旁组织纳入后续研究。16例结直肠癌标本中FGG表达阳性率为75%(12/16)，15例癌旁组织表达阳性率为26.7%(4/15)。采用?2检验得出FGG在结直肠癌组织的表达高于癌旁(P=0.007)，再次印证了在结直肠癌组织、癌旁组织中FGG蛋白的表达差异性。 4.STRING数据库得出SERPINC1、SERPIND1、ALB、FGA、HRG、F5、FGB、ITIH2等与FGG的联系密切相关，FGG蛋白的主要分子功能是酶抑制剂、跨膜胆固醇转移、与信号受体结合等。其参与的主要生物学过程是调节凝血、血小板脱颗粒等。COSMIC数据库的挖掘，得到错义突变为主要方式，占比为47.20%，其次为同义突变，占比为18.46%。检索Oncomine数据库后，得出FGG在结直肠癌中的表达为上调。从c-BioPortal数据库中我们检索了FGG在结直肠癌中的共表达基因，我们将他们按照相关性的强度从高到底排列，FGA、FGB、AHSG、RHOXF2B、HBE1、APOA2、APOB、MAGEC1、GAGE1、RHAG分别位列相关性的前10名。COEXPEDIA数据库检索后，发现共有208个基因与FGG表达相关，按照分值大小我们将其从高到低排列，前五位为：FGB、FGA、ALB、APOH、APOA2。 结论： 1．在结直肠癌中，FGG蛋白的表达高于癌旁组织，是上调表达的蛋白。 2．与FGG共表达相关性最强的两个基因分别为FGA和FGB。 3．错义突变是在结直肠癌中最容易发生的突变类型。
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