摘要
急性肺损伤(ALI)是动物饲养过程中严重的呼吸道疾病，严重威胁着畜禽的生命安全。越来越多的研究表明ALI的发生发展过程与炎症和氧化应激反应密不可分。因此，减轻炎症和氧化应激反应对于改善ALI具有重要意义。紫檀芪是一种具有生物活性的纯天然物质，多存在于常见的蓝莓、葡萄等植物中，有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌等药理活性，同时越来越多的研究表明紫檀芪能够显著改善多种组织器官的损伤。本论文以紫檀芪为研究对象，建立LPS诱导的ALI小鼠模型，初步研究紫檀芪对其保护作用及其潜在机制。而后应用紫檀芪防治ALI雏鸡，观察紫檀芪对雏鸡的保护效果。 首先，构建LPS诱导的ALI小鼠模型，分别用10、20和40mg/kg紫檀芪对该模型进行预处理。其次，检测小鼠肺脏湿干重比值(W/D)的变化，并对其HE染色进行病理组织学观察；对支气管肺泡灌洗液(BALF)中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞进行计数，以及测定总蛋白浓度；测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性；然后，测定肺组织抗氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，以及氧化应激指标丙二醛(MDA)含量；qRT-PCR测定肺组织中COX-2、iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化；最后，Westernblotting检测NF-κB信号转导通路中p-IκB和p-p65蛋白以及Nrf2/HO-1信号转导通路中Nrf2和HO-1蛋白水平。结果显示，LPS诱导的ALI小鼠模型构建成功；紫檀芪降低了ALI小鼠肺脏的W/D值，改善了肺组织损伤程度，如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等；减少BALF中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞数目，以及总蛋白浓度；降低肺组织MPO活性；提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性，并降低MDA含量；降低肺组织中COX-2、iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达；降低肺组织中p-IκB和p-p65蛋白水平，升高肺组织中Nrf2和HO-1蛋白水平。提示紫檀芪对ALI的保护作用机制主要是通过抑制NF-κB和激活Nrf2/HO-1信号转导通路，即抑制炎症反应和氧化应激反应。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型具有保护作用，可作为治疗或保护LPS诱导的ALI雏鸡的候选药物。 构建LPS诱导的ALI雏鸡模型，分别饲喂50、100和200mg/kg紫檀芪对该模型进行处理。每日对雏鸡进行称重，并观察其采食量以及精神和体征状态；眼观肺脏形状、颜色、充血和坏死情况等组织病理学变化；检测雏鸡肺脏W/D的变化，并对其HE染色进行病理组织学观察；测定肺组织MPO活性；测定肺组织抗氧化应激指标SOD、CAT、GSH-Px活性，以及氧化应激指标MDA含量；qRT-PCR测定肺组织中COX-2、iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化。结果显示，LPS诱导的ALI雏鸡模型构建成功，但其每日采食量以及精神和体征状态并无明显异常；紫檀芪提升了ALI雏鸡的体重日增长率；雏鸡肺组织随着紫檀芪剂量的增加，形状和颜色逐渐趋于正常，充血和坏死情况有所改善；降低了ALI雏鸡肺脏的W/D值，改善了肺组织损伤程度，如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等；降低肺组织MPO活性；提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性，并降低MDA含量；降低肺组织中COX-2、iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI雏鸡模型具有保护作用。 综上所述，本论文证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型发挥保护作用，并初步揭示其作用机制是通过抑制炎症和氧化应激反应来实现的，而应用紫檀芪防治雏鸡ALI也证实了良好的保护效果。以上结果不仅为生产实践中有效防治ALI提供借鉴和参考，而且也可为雏鸡功能性饲料添加剂的研发提供实验依据。
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