摘要
目的： 基于国内外和多年来对焦亡在2型糖尿病胰岛β细胞损伤中的基础研究成果，探索SGLT-2抑制剂恩格列净与糖尿病胰岛βTC-6细胞焦亡之间的关系，从而观察恩格列净对高糖诱导的胰岛β细胞可能有抗焦亡作用。细胞焦亡有望成为治疗胰岛β细胞损伤的新靶点，恩格列净有望成为新型抗焦亡药物。 方法： 1．体内实验：空白对照组(Control)小鼠由4-8周龄C57/bl6j野生小鼠组成，饲料和水喂养6个月，糖尿病模型小鼠（db/db）由4-8周龄的BKS-Leprem2Cd479/Gpt小鼠组成，饲料和水喂养6个月，恩格列净用药组（db/db+EMPA）由BKS-Leprem2Cd479/Gpt小鼠组成，予以恩格列净10mg/Kg/d灌胃6个月。解剖小鼠摘取胰腺组织，用10%中性标本固定液的封存，胰腺组织进行包埋切片，使用苏木精-伊红（HE）染色检测空白对照组、糖尿病模型组和恩格列净用药组小鼠胰腺组织的差异;运用免疫组织化学（IHC）检测各组对小鼠胰腺组织的NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平的影响；运用组织免疫荧光（IF）检测各组对小鼠胰腺组织的NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平的影响。 2．体外实验：运用CCK-8检测不同浓度梯度的葡萄糖、恩格列净以及利奈唑胺在不同时间节点对βTC-6细胞增殖的影响，确定葡萄糖、恩格列净、利奈唑胺的最适浓度及作用时间。然后分为低糖培养基空白对照组（Control）、高糖组(HG)、高糖+恩格列净组（HG+EMPA）、高糖+利奈唑胺组（HG+LZD）、高糖+恩格列净+利奈唑胺组（HG+EMPA+LZD），所有分组实验处理24小时，提取蛋白后使用Western-blot检测各组对βTC-6细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平的影响。应用细胞免疫荧光（IF）检测各组对βTC-6细胞NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平的影响。 结果： 1．根据胰腺组织的HE染色可见,恩格列净对糖尿病模型下的小鼠胰腺组织有保护作用。胰腺组织的免疫组化染色和免疫荧光得出了相似的结果，糖尿病模型鼠较正常小鼠的焦亡相关NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达上调，而糖尿病小鼠加用恩格列净后，上述焦亡相关蛋白表达下调。 2．根据CCK-8活力测定结果得出葡萄糖、恩格列净、利奈唑胺最佳作用浓度及时间，即葡萄糖6g/L、恩格列净200nmol/L、利奈唑胺10ug/ml，拟作用时间为24h。胰岛β细胞的Western-blot实验结果和免疫荧光结果得出相似的结果，在H G、HG+LZD中，焦亡相关的NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达上调，而在加用恩格列净后的HG+EMPA、HG+EMPA+LZD中，上述焦亡相关蛋白表达下调。 结论： 1．恩格列净可能对高糖诱导的胰岛β细胞有抗焦亡作用。 2．恩格列净可能对糖尿病模型鼠的胰岛组织有抗焦亡作用。 3．恩格列净可能对高糖诱导的胰岛β细胞和糖尿病模型鼠的胰腺组织的抗焦亡机制是通过抗NLRP3/Caspase-1/GSDMD的焦亡通路。 4、细胞焦亡有望成为治疗胰岛β细胞损伤的新靶点，恩格列净有望成为新型抗焦亡药物。
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